老年性痴呆 (AD)是1907年AloisAlzheimer首先发现并命名的一种神经系统退行性疾病。临床以大脑皮层获得性高级功能受损，即痴呆为主要特征，包括不同程度的记忆力、感觉能力、判断力、思维能力、运动能力等受损，以及情感反应障碍和性格改变。世界卫生组织(WHO)定义65岁以上的人为老年人。随着社会人口老龄化的发展，老年性痴呆已成为世界性社会问题，据调查约5—10％的老年人受到老年痴呆的困扰，痴呆已成为老年人的第四位死因。目前，我国AD患者约为600万，估计到2050年，AD患者预期可达到2500万，将成为影响家庭和社会发展的一个重要制约因素。 虽然现代医学对老年性痴呆的病因及发病机理的研究已经达到分子水平，然而在治疗上仍没有理想的办法。近年来国内外学者将治疗老年性痴呆的希望转向了中国传统医学。祖国医学认为老年性痴呆系老年肾精虚损，精气不能上充于脑，以致髓海空虚而痰凝血瘀，使脑窍受损，元神失用，产生各种症状。当治以益肾填精，辅以养心健脾，活血化瘀，祛痰开窍之法。 定志小丸源于唐代孙思邈的《备急千金要方》，由人参、远志、茯苓、菖蒲四味药组成，现己成为临床用于改善或治疗老年性痴呆的常用基础方剂之一。但传统的中药汤剂具有口感差、用药量大、患者依从性差等缺点，因此河北医科大学新药研发部欲利用现代的制剂工艺将定志小丸制成中成药，本实验将以自然衰老小鼠为观察对象，观察不同提取工艺的定志小丸在药效学上的差异，并进行机制方面的探讨。实验内容如下： 第一部分定志小丸粗提物对老龄小鼠学习记忆的影响及机制研究 目的：采用跳台实验观察不同剂量的定志小丸水提物和醇提物对自然衰老小鼠学习记忆的影响，并通过测定血清及脑组织中脂质过氧化产物含量和酶的活性，进行药效学的比较，为确定下一步的提取工艺提供帮助。 方法：选用体重40-60g，雄性自然衰老KM小鼠，随机分为6组，①空白对照组；②尼莫地平阳性对照组；③定志小丸水提物5g/Kg组；④定志小丸水提物20g/Kg组；⑤定志小丸醇提物5g/Kg组；⑥定志小丸醇提物20g/Kg组。给予等容积药物或蒸馏水，每日灌胃一次，连续30天。于末次给药后1h进行学习训练，记录小鼠第一次跳下平台的时间此为触电潜伏期(错误潜伏期)和5分钟内跳下次数为遭受的电击数(错误次数)；24小时后重复测试，作为记忆测试成绩。摘眼球取血并制备脑组织匀浆，按试剂盒操作说明分别测定血清和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及脑内胆碱酯酶的活性。 结论：定志小丸醇提物在提高自然衰老小鼠的学习记忆能力、增强胆碱能神经功能及提高机体抗氧化能力方面优于定志小丸水提物。 第二部分不同醇提工艺的定志小丸对老龄小鼠学习记忆的影响及机制研究 目的：观察不同醇提工艺的定志小丸对自然衰老小鼠学习记忆能力、脑细胞形态的影响，并通过测定血清和脑组织中的生化指标进行药效学的比较，以进一步确定最佳的提取工艺和方剂配比，为新药报批提供理论依据；并对定志小丸抗痴呆机制进行进一步探讨。 方法：固定人参、茯苓、远志、石菖蒲以3:3:2:2的用量配比，分别采用不同浓度的乙醇(A)、不同提取时间(B)和不同乙醇用量(C)，按照正交实验设计L<,9><'3(4)>方法，制成9批药液备用(含生药量0.33g/ml)。采用12-13月龄的KM雄性小鼠，随机分成11组，其中9组分别灌胃给予用不同工艺制备的定志小丸提取物(1-9号药液) 5g/kg，阳性对照药组灌胃给予 0.15％尼莫地平溶液，空白对照组灌胃给予等容积水，每日给药 1 次，灌胃容积0.2ml/10g体重，连续给药30天。末次给药后1小时进行学习训练，记录各组小鼠学习测试成绩，24小时后重复测试作为记忆测试成绩。摘眼球取血并制备脑组织匀浆，分别测定血清和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及脑内胆碱酯酶的活性。小鼠断头取脑，10％多聚甲醛固定，常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色，观察海马神经元损伤状况。 结论：通过对定志小丸不同工艺的筛选，发现在醇提过程中醇的浓度和用量及提取次数都是影响药效学的关键因素，其中5号药提取物，除了在改善动物学习记忆的行为学方面明显外，对于动物血清、脑组织中影响学习记忆的生化指标也有明显的改善。