毛细管电泳激光诱导荧光检测蛋白质

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随着后基因组时代的到来,生物研究的重心逐渐从DNA、RNA等遗传物质转移到蛋白质等功能物质上来。蛋白质组学研究,尤其是单细胞蛋白质组研究对当前的生物大分子分离、分析技术提出了新的要求。  毛细管电泳曾以其快速高效的特点极大的推动了人类基因组计划的完成,并大大降低了开销。而在蛋白质分离分析领域,毛细管电泳又以其纳升级的进样量,纳摩尔级的检测极限和极高的分辨率越来越发挥出难以取代的作用。  本文主要研究了基于毛细管电泳的高灵敏度、高分辨率的蛋白质分离、激光诱导荧光检测系统的构建以及标准蛋白质样品毛细管电泳分离条件的摸索。本系统采用毛细管无胶筛分电泳模式,蛋白质样品在进样之前用FQ荧光发生试剂进行衍生,得到具有荧光特性的蛋白质-FQ衍生物。使用3万伏高压电源进行电泳分离、蛋白质-FQ衍生物在波长为488纳米的氩离子激光诱导下产生荧光,荧光信号再通过滤镜组被光电倍增管收集放大,滤波,通过数据采集程序采集,得到三种标准蛋白质的电泳图谱。通过对图谱中分离度、峰高和灵敏度等参数的分析,改变缓冲液pH、分离场强、筛分介质浓度和SDS浓度等一系列分离相关的条件,获得较好的分离效果,基本达到高灵敏度、高分辨率的要求。
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