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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属嗜肝DNA病毒科,是已知感染人类的最小DNA病毒。HBV感染不仅可以引起急、慢性肝炎,而且还与肝硬化、肝癌的发生、发展密切相关。根据文献报道,乙肝病毒表面抗原所含LS蛋白是导致肝细胞损伤、死亡和纤维化病变的主要原因。一些宿主蛋白与LS有相互作用,能够抑制乙肝病毒的感染、复制。PLSCR1(磷脂爬行酶1,phospholipid scramblase 1)属于Ca2+结合的棕榈化Ⅱ型膜蛋白,非棕榈化的PLSCR1蛋白可定位于细胞核内,并与基因组DNA序列结合。PLSCR1蛋白广泛分布于细胞膜与细胞核中,参与了细胞的分化增殖,并且与信号的转导有关联。最初文献报道该蛋白有抗白血病作用[25]。在本实验前期工作中,通过应用Far-westen-2D结合质谱鉴定技术,从正常人肝细胞中筛选乙肝表面抗原相互作用蛋白,共获得了15个候选蛋白分子。磷脂爬行酶1(Phospholipid scramblase 1,PLSCR1)为上述实验筛选出的一个蛋白分子,与乙型肝炎病毒表面抗原(surface HBV antigens, HBsAg)有相互作用,继而通过酵母双杂交技术验证其有体外抑制HBV的作用。本论文通过构建PLSCR1的分段真核表达载体,并和带有myc抗体标签的乙肝病毒打蛋白(LS蛋白)共表达于细胞中,采用免疫共沉淀实验筛选PLSCR1和HBsAg有效结构域。另外,通过酶联免疫吸附实验(enzyme linked immuno-sorbent assay,ELISA)验证了PLSCR1各片段对HBsAg的抑制作用。结果显示,部分PLSCR1片段对HBV的抑制作用比PLSCR1全长更显著,部分片段表现为促进宿主细胞中HBsAg的表达。其中1-118aa、81-118aa、61-118aa、31-118aa位置片段有抑制乙肝病毒HBsAg的作用;1-80aa、1-60aa、1-30aa片段有促进HBsAg分泌的作用。综上所述,本研究选取人体组织中和HBsAg具有相互作用的蛋白PLSCR1,并筛选了PLSCR1与HBsAg的有效结构域,为抗乙肝的靶标药物提供候选靶标;同时,筛选出的对HBV中HBsAg的表达表现为促进作用的片段,可以为建立新的研究乙肝的细胞模型提供基础。