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玉米赤霉烯酮(Zearelenone，ZEN)主要是由玉米赤霉菌(Gibberella zeae)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)和三线镰刀菌(Fusarium tricinctum)等真菌所产生的具有雌激素毒性作用的真菌毒素。赭曲霉毒素(Ochratoxins)产生菌主要是赭曲霉(Asperillus ochraceus)和纯绿青霉(Penicillium verrucosum)，具有肾脏毒性、免疫抑制毒性、神经毒性、致畸性及致癌性，有A、B、C、D四种化合物。其中毒性最大、分布最广、对农作物的污染最严重、与人类健康关系最密切的是赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)。1993年国际癌症研究机构(The International Agency for Research on Cancer，IARC)已将OTA列为可能的人类致癌物。本研究分别建立了IAC-HPLC(Immunoaffinity column-High Performance Liquid Chromatography，IAC-HPLC)方法检测谷物中的ZEN和OTA；并用此方法检测了49份市售谷物中的ZEN含量及20份市售谷物中的OTA含量。现将研究结果分述如下：1．建立IAC-HPLC方法检测谷物中的ZEN1．1抗ZEN单克隆抗体免疫亲和柱的研制将制备好的抗ZEN单克隆抗体与溴化氰(CNBr)活化的琼脂糖凝胶(Sepharose)4FF偶联。采用紫外扫描鉴定偶联反应，间接竞争酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assays，ELISA)方法及HPLC方法评价制备好的免疫亲合柱。每根抗ZEN单克隆抗体免疫亲和柱，使用0.5mL活化胶，0.35mg抗ZEN单克隆抗体，柱容量为0.40μg。1．2建立IAC-HPLC分析谷物中ZEN含量该方法线性范围10μg／kg～700μg／kg，信噪比为3：1时，最低检测限为10μg／kg；小麦和玉米样品添加ZEN标准品(60μg／kg～300μg／kg)，用80％甲醇水溶液提取样品中ZEN，经免疫亲和柱净化、0.01mol／L的PBS淋洗、纯甲醇洗脱，HPLC荧光法检测，平均回收率分别为76.33％～90.10％和78.36％～99.64％，相对标准偏差分别为6.68％～10.93％和7.28％～10.33％。1．3市售谷物中ZEN含量的测定对49份谷物使用本实验建立的IAC-HPLC方法进行了检测，同时使用商品化ELISA试剂盒进行了对照。二者的结果经统计学分析无显著性差异(P＞0.05)。2．建立IAC-HPLC方法检测谷物中的OTA2．1抗OTA单克隆抗体免疫亲和柱的制备将制备好的抗OTA单克隆抗体与CNBr活化的Sepharose 4FF偶联。采用紫外扫描鉴定偶联反应，间接竞争ELISA方法及HPLC方法评价制备好的免疫亲合柱。每根抗OTA单克隆抗体免疫亲和柱，使用0.5mL活化胶，0.10mg抗OTA单克隆抗体，柱容量为0.15μg。2．2建立IAC-HPLC分析谷物中OTA含量该方法线性范围0.2μg／kg～300μg／kg，信噪比为3：1时，最低检测限为0.2μg／kg；小麦和玉米样品添加OTA标准品(5μg／kg～100μg／kg)，用70％甲醇水溶液提取样品中OTA，经免疫亲和柱净化、0.01mol／L的PBS淋洗、纯甲醇洗脱，HPLC荧光法检测，平均回收率分别为90.72％～102.87％和75.60％～105.28％，相对标准偏差分别为0.59％～12.83％和10.13％～12.72％。2．3市售谷物中OTA含量的测定对20份谷物使用本实验建立的IAC-HPLC方法进行了检测，同时使用商品化ELISA试剂盒进行了对照。二者的结果经统计学分析无显著性差异(P＞0.05)。