论文部分内容阅读
背景与目的:肝癌是目前世界上致死率较高的癌症,并且逐年上升,急需开展新的治疗手段来提升存活率,现阶段仍采取手术方式为主,但治疗效果不是很理想,因此开发新的治疗手段显得十分迫切,而通过在分子水平上研究肝癌的发生发展的情况已经成为国际主流,并已体现出其重要价值。人硫酸酯酶1(Hsulf-1)能够通过水解细胞表面的硫酸类蛋白多糖(HSPGS)来抑制多种信号通路,从而进一步抑制肿瘤发生发展,已经在许多研究中证明是一种抑癌基因。硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPGS)可通过稳定、保护及运输配体促进配体-受体间的相互作用来达到调控多种信号通路的目的,由此介导细胞与微环境组成成分作用,控制着细胞形成、粘附、增殖以及分化作用。最早有报道称在卵巢癌中,重新表达的Hsulf-11能够减少FGF-2、HG-EGF信号通路,抑制癌细胞增殖及侵袭转移,而持续的报道显示Hsulf-1还能够抑制HGF及VEGF信号通路。现有的证据表明STAT3信号能够被多种生长因子受体激活,如EGFR,PDGFR,但是仍没有报道Hsulf-1对STAT3信号通路的影响。本文就肝癌细胞中Hsulf-1基因对STAT3信号通路的影响,并通过STAT3言号通路对肝癌细胞生长,转移及凋亡方面的影响,探讨Hsulf-1(人硫酸酯酶-1)基因在肝癌发生发展中的作用。方法:应用RT-PCR方法测定Hsulf-1在肝癌细胞中的表达,当通过不同浓度的5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-aza-dC)及曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)处理HepG2细胞后,检测Hsulf-1的表达情况。本研究构建了Hsulf-1表达质粒载体及STAT3siRNA,各HepG2细胞组分为Hsulf-1转染+STAT3siRNA转染组,Hsulf-1转染+对昭siRNA组,STAT3siRNA转染组+空白质粒载体组,空白质粒载体+对照siRNA组及未处理组,通过western blotting测定Huslf-1在HGF加入前后对STAT3磷酸化(p-STAT3)水平及下游蛋白的影响,MTT方法及Transwell chamber方法分析测定肝癌细胞的生长及转移情况,在经过顺铂处理后,通过流式细胞仪观察Hsulf-1对细胞周期及细胞凋亡的作用。结果:Hsulf-1在肝癌细胞系中(HepG2, Hep3B,Huh-7, SMMC-7221)表达水平下降,通过处理HepG2细胞后,我们发现在HGF刺激下,随着c-met磷酸化表达水平的提高,p-STAT3的表达水平也同时提高,但在转染Hsulf-1表达质粒载体后,p-STAT3表达水平下降,其下游蛋白cyclinD1及bcl-2表达也下降。在与对照组相比后,我们发现Hsulf-1可明显抑制HepG2细胞生长及转移,阻断G0/G1及G2/M期以及促进细胞凋亡,而在转染STAT3siRNA后,其在阻断G0/G1期及促进细胞凋亡的作用更加明显,且具有统计学意义p<0.01),但STAT3信号通路并不影响Hsulf-1在HepG2中G2/M期的阻断中的作用。结论:1、Hsulf-1在肝癌细胞中表达下降;2、Hsulf-1在肝癌细胞中可抑制由HGF刺激的p-STAT3及下游蛋白的表达水平;3、在肝癌细胞中,Hsulf-1可通过抑制STAT3信号通路抑制细胞增殖及转移,并同时表明其抗增殖作用与部分由STAT3信号通路介导的阻断GO/G1,G2/M期及诱导细胞凋亡有关,但STAT3信号通路并不影响Hsulf-1在HepG2细胞中G2/M期阻断的作用。