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脂肪酶是一类特殊的酯键水解酶,广泛存在于动物、植物和微生物中。近年来,脂肪酶已在食品加工、生物柴油制备、造纸、洗涤、医药等领域显示出了潜在的推广应用前景。但目前用于工业化生产的脂肪酶大多依靠进口,由于其价格昂贵,严重限制了它的推广使用。因此,有关脂肪酶的研发已成为当今研究的热点。本试验从油污土壤、油垢中分离产脂肪酶菌株,并对分离到的菌株进行分类地位鉴定;同时,对其发酵产酶条件及其酶学性质进行了研究。试验结果表明,筛选出了一株可产脂肪酶活力较高的菌株,命名为HDY-76;通过形态学观察和分子生物学鉴定,确定菌株HDY-76为解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)。本试验确定的菌株HDY-76最佳发酵产酶条件为:蛋白陈20.0 g/L、蔗糖5.0 g/L、NH4Cl 0.5 g/L、MgSO4 0.3 g/L、NaCl 1.0 g/1L、Tween-80 0.4 mL/L(v/v)、转速 200±5r/min、pH3.0、培养温度 28℃、接种量 1.0%(v/v)、装液量 60mL/250mL、振荡培养50 h,脂肪酶产量由优化前(155.6±3.87)U/mL提高到(252.89±4.12)U/mL,提高了 62.53%。菌株HDY-76产脂肪酶的最适作用温度为45℃、最适作用pH为5.5;Mg2+对菌株HDY-76产的脂肪酶有激活作用,而Na+、Fe2+、EDTA、Cu2+、Mn2+对其有抑制作用;菌株HDY-76脂肪酶在pH4.0-6.0、温度30-50℃时有较好的稳定性。另外,本试验研究利用PCR技术成功克隆到了脂肪酶基因(lip7),并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中进行了表达,使酶活力提高到(329.43±6.52)U/mL,与优化后的酶活(252.89±4.12)U/mL相比提高了 30.27%。