大豆抗原蛋白引起仔猪肠道致敏损伤的信号转导机制研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:kangliwonuer
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本试验在断奶仔猪日粮中添加β-伴大豆球蛋白或大豆球蛋白,旨在研究大豆抗原蛋白对仔猪肠绒毛形态及细胞器完整性、对仔猪肠道功能的影响,以及大豆抗原蛋白引起仔猪肠道致敏损伤信号转导机制。  采用随机分组设计,选择40头20日龄体况等指标相近、临床检查健康的“杜×长×大”三元杂交仔猪,随机分成4组,每组10头,分别为哺乳组、断奶组、断奶+大豆球蛋白组、断奶+β-伴大豆球蛋白组。除哺乳组外,所有仔猪于21日龄断奶,并开始饲喂含有大豆抗原蛋白的饲粮,试验期为7d。在仔猪20和27d,经前腔静脉采血,分离血浆及血清,用EHSA的方法测定二胺氧化酶(DAO)、caspase-3酶活性及NO、5-羟色胺(5-HT)、D-乳酸(D-LA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。在仔猪27d,每组随机选择5头仔猪进行宰杀,取十二指肠、空肠及回肠分成数份存放于多聚甲醛固定液、戊二醛固定液及液氮中,固定液中的组织用于免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测小肠中NF-κB、JNK、p38蛋白的表达以及电镜观察肠绒毛形态等,液氮中的组织用于qRT-PCR法检测小肠中NF-κB、JNK、p38mRNA的相对表达量。  结果显示:  1.电镜观察下,哺乳组肠绒毛密度高,排列整齐,断奶组少量绒毛缺损,大豆抗原蛋白组仔猪肠绒毛则出现了不同程度的细胞器结构损伤和细胞坏死。  2.在27d,与断奶组相比,哺乳组仔猪血浆中D-乳酸、二胺氧化酶及5-羟色胺水平较低(P>0.05),其中D-LA水平显著降低(P<0.05);大豆抗原蛋白组D-LA、5-HT及DAO水平均极显著升高(P<0.01),其中大豆球蛋白组D-LA水平显著高于β-伴大豆球蛋白组(P<0.05)。  3.在27d,大豆抗原蛋白组仔猪血清中炎性因子NO、TNF-α水平均极显著高于断奶组(P<0.01),其中大豆球蛋白组NO水平显著高于β-伴大豆球蛋白组(P<0.05),哺乳组与断奶组之间差异不显著(P>0.05);大豆球蛋白组仔猪血清中caspase-3酶活性水平极显著高于断奶组(P<0.01),β-伴大豆球蛋白组仔猪血清中caspase-3酶活性水平极显著高于断奶组(P<0.01)且显著高于大豆球蛋白组(P<0.05),哺乳组低于断奶组,但无显著差异性(P>0.05)。  4.与断奶组相比,十二指肠及空肠中NF-κB mRNA相对表达量,哺乳组降低,但无显著差异(P>0.05),大豆抗原蛋白组均极显著升高(P<0.01);回肠中NF-κBmRNA相对表达量,哺乳组显著降低(P<0.05),大豆抗原蛋白组均极显著升高(P<0.01),其中大豆球蛋白组显著高于β-伴大豆球蛋白组(P<0.05);NF-κB蛋白表达与之有相似趋势。  5.与断奶组相比,十二指肠中.JNK mRNA相对表达量,哺乳组显著降低(P<0.05),大豆抗原蛋白组均极显著升高(P<0.01),其中大豆抗原蛋白组极显著高于β-伴大豆球蛋白组(P<0.01);空肠中JNK mRNA相对表达量,断奶组与哺乳组之间无显著差异(P>0.05),大豆抗原蛋白组均极显著升高(P<0.01);回肠中JNK mRNA相对表达量,哺乳组降低(P>0.05),大豆抗原蛋白组均极显著升高(P<0.01),其中β-伴大豆球蛋白组极显著高于大豆球蛋白组(P<0.01);JNK蛋白表达与之有相似趋势。  6.与断奶组相比,十二指肠中p38mRNA相对表达量,哺乳组显著降低(P<0.05),大豆抗原蛋白组均极显著升高(P<0.01);空肠中p38mRNA相对表达量,哺乳显著降低(P<0.05),大豆抗原蛋白组均极显著升高(P<0.01),其中大豆球蛋白组显著高于β-伴大豆球蛋白组(P<0.05);回肠中p38mRNA相对表达量,哺乳组与断奶组无显出差异(P>0.05),大豆抗原蛋白组均极显著升高(P<0.01),其中β-伴大豆球蛋白组显著高于大豆球蛋白组(P<0.05);p38蛋白表达与之具有相似趋势。  试验证实,β-伴大豆球蛋白及大豆球蛋白均能破坏仔猪肠绒毛完整性及细胞结构,引起小肠损伤。同时诱导NF-κB、JNK及p38基因及蛋白表达量的增加,通过刺激炎性因子的表达调控炎症及凋亡通路,最终引起机体炎症反应及细胞凋亡。
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