布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspE的相互作用组学研究

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布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)入侵到机体内部而引起的一种人畜共患的传染病,在全世界的范围内广泛地流行,布病不但危害着公共的健康,还对畜牧业的发展有着重大的影响,造成了巨大的经济损失。布鲁氏菌主要侵袭的对象有羊、牛、猪,布鲁氏菌能够引起怀孕母畜的流产,还能够破坏雄性动物生殖系统从而导致不育。而人类感染布鲁氏菌的主要症状表现为慢性的持续性的感染,其具体的表现为波状热、全身乏力、多汗及关节部位的肿痛等症状。布鲁氏菌为胞内寄生菌,其侵入细胞及在胞内生存以建立持续性感染的策略对于布鲁氏菌致病性来说有重大意义。布鲁氏菌无外毒素和荚膜等典型的毒力因子,也没有Ⅲ型的分泌系统,但是却有一个IV型分泌系统(Type IV secretion system,T4SS)。T4SS是布鲁氏菌中十分重要的毒力因子,布鲁氏菌T4SS能够通过调节宿主细胞的信号通路在内质网中建立复制生态位,从而抑制宿主的免疫应答,促进形成慢性感染,T4SS在介导布鲁氏菌胞内生存的机制与抑制宿主免疫应答机制当中起非常关键的作用。效应蛋白(又称效应子)是一种有赖于布鲁氏菌IV型分泌系统才能分泌的蛋白,T4SS的作用主要是来通过分泌效应蛋白来作用于宿主细胞的靶标上从而发挥其功能。效应蛋白一般情况下是作用在宿主关键的信号通路,对于促进细菌感染过程起非常重要的作用。BspE是依赖于布鲁氏菌T4SS而分泌出的效应蛋白,研究BspE在宿主细胞中的生存及其作用机制本试验通过将BspE构建在p CAGGS-HA载体上并转染至HEK-293T细胞中,通过WB检测其表达;而后通过免疫沉淀(IP)技术捕获BspE和与BspE相互作用的蛋白,利用高分辨生物质谱技术分析与BspE相互作用的蛋白。共鉴定到70个宿主蛋白能够与BspE发生特异性互作,同时利用软件对鉴定到的相互作用蛋白进行相互作用网络分析。发现鉴定蛋白参与凋亡通路及细胞内物质运输通路的调节,表明布鲁氏菌可能通过与相关蛋白发生相互作用实现对通路的调节。
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