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冬凌草[Rabdosia rubescens(Hemsl)Hara],是唇形科香茶菜属植物,主要化学成分为二萜类、三萜类和甾体类、黄酮类、生物碱以及其它含N类化合物,冬凌草具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗突变、β-受体拮抗以及抗氧化等药理作用。以冬凌草为原料的产品应用较为广泛,但是1992年《卫生部中药材标准》仅对冬凌草的性状和鉴别有所描述,而没有涉及到质量控制,本文以求采用指纹图谱的方法来完善冬凌草的质量控制问题。
冬凌草提取方法优化部分,研究了超声法提取冬凌草的最佳提取工艺条件,采用正交实验法以冬凌草甲素的提取率为考察指标,考察了超声时间、提取次数、溶剂用量对药材提取效果的影响,确定了冬凌草的最佳提取条件为12倍的溶剂量,超声提取2次,每次40 min。
对济源地区两种主含成分不同的冬凌草进行不同溶剂的提取,分别得到三种提取物:乙醇提取物、总二萜类和水提物,对三种提取物选择合适的色谱分析条件并对高效液相色谱图进行分析。
本文初步对河南以及山东、河北、广东四个产地15批冬凌草药材进行了指纹图谱研究,建立了冬凌草药材乙醇提取物的高效液相指纹图谱的研究方法。确定了指纹图谱的高效液相最佳色谱分离条件为:流动相为乙腈-水-0.2%磷酸系统,梯度洗脱,检测波长240 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃,运行时间为80min,该实验方法的精密度、稳定性、重复性均较好。通过中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004A对其中14批不同产地的药材样品进行系统的分析研究,确定了其中11个峰为指纹图谱的共有峰。以冬凌草甲素为参照峰,对共有色谱峰进行相对保留时间和相对峰面积的计算,作为评价指纹图谱的技术参数。计算得到各指纹图谱之间的相似度,均符合国家食品药品监督管理局颁发的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》和《中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南》的要求。
通过本课题的研究为冬凌草的综合质量控制提供参考依据,同时也为冬凌草药材的规范化种植提供科学依据,促进其产业开发化进程。