家蚕Arp2/3复合物p21亚基的功能及定位

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肌动蛋白的聚合可以介导细胞的多种生理功能,如组成细胞骨架、维持细胞形态及在细胞运动、肌肉收缩和细胞分裂中都起着重要的作用。Arp2/3(肌动蛋白相关蛋白2/3)复合物,分子量约为220:kDa.,由7个序列比较保守且紧密相联的不同亚基组成(Arp2、鲫3、P42Arc、P34-Arc、P21-Arc、P20-Arc、P16-Arc),p21-Arc亚基亦称为ARPC3。在肌动蛋白聚合信号通路中,WASP家族蛋白激活Arp2/3复合物,激活后的Arp2/3复合物附着在肌动蛋白母丝(mother-filament)一侧起始了新丝的聚合。Arp2/3复合物首先与肌动蛋白丝的一侧结合,再起始肌动蛋白新丝的合成,而且在它的作用下,使新丝与母丝在构象上呈70°夹角。 我们从自已构建的家蚕cDNA库中克隆到一个类p21-Arc的基因,命之为Bmp21,原核表达及纯化Bmp21融合蛋白,并免疫新西兰兔得到抗血清。通过亚细胞免疫荧光定位实验,我们发现:Bmp21在细胞质中大量表达,并首次发现在细胞核中亦存在,尤其当细胞处于分裂期时,细胞质中的Bmp21富集到核膜周围,而当细胞分裂结束后,Bmp21又均匀分布于细胞浆中。为了研究Bmp21亚基在家蚕细胞中的功能,我们进行了RNAi实验,Bmp21基因沉默后,经流式细胞仪检测,发现在基因沉默后96h,处于G2/M期的细胞明显增多,在基因沉默后120h,细胞出现大量死亡,我们推测.Bmp21,基因沉默后可能导致细胞正常分裂受阻。
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