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第一部分 VEGFR2和VTN在胃癌中的表达及其与临床和预后的关系 目的： 研究血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）和玻连蛋白（VTN）在胃癌中的表达及其与临床病理特征和预后之间的关系。 方法： 1、2010年01月至2012年12月期间于苏州大学附属第一医院和苏州市相城人民医院接受手术治疗的156例胃癌患者为研究对象。以免疫组化法检测VEGFR2和VTN在胃癌组织中的表达。 2、按免疫组化评分将患者分为VEGFR2高、低表达组和VTN高、低表达组。 3、分析VEGFR2和VTN的表达与胃癌的临床病理因素和生存的关系。并对胃癌患者临床病理资料、VEGFR2和VTN的表达进行多因素回归分析。 结果： 1、VEGFR2表达在患者性别（P=0.331）、年龄（P=0.427）、肿瘤大小（P=0.153）、Lauren分型（P=0.739）和肿瘤分化程度（P=0.912）之间无明显关系，与 T分期（P<0.001）、N分期（P<0.002）和疾病分期（P<0.001）有关。VTN表达与患者性别（P=0.305）、年龄（P=0.494）、肿瘤大小（P=0.120）和Lauren分型（P=0.826）肿瘤分化程度（P=0.687）之间无明显关系，与T分期（P<0.003）、N分期（P<0.003）和疾病分期有关（P<0.001）。 2、VEGFR2高表达组的 VTN的免疫组化评分中位值为9，显著高于 VEGFR2低表达组的VTN中位值3(P<0.001)。对所有患者至少随访36个月。156例胃癌患者的中位OS为42个月，中位DFS为36个月。VEGFR2高、低表达组患者的中位OS为35月和48月（χ2=4.158，P=0.041），VEGFR2高、低表达组患者的中位DFS为28月和40月（χ2=4.346，P=0.037）。VEGFR2低表达组的胃癌患者有着较高的 OS和DFS。VTN高、低表达组患者的中位OS为34月和52月（χ2=4.223，P=0.040）， VTN高、低表达组患者的中位DFS为26月和44月（χ2=4.114，P=0.043）。VTN低表达组的胃癌患者有着较高的OS和DFS。 3、多因素Cox回归分析发现：疾病分期、VEGFR2和VTN表达是影响DFS和OS的预后因素。 结论： VEGFR2和VTN表达对胃癌的诊断和预后有着重要的临床预测价值。 第二部分 VEGFR2参与胃癌恶性生物学行为的机制研究 目的： 探讨血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）在不同胃癌细胞系中的表达情况，以及 VEGFR2基因表达对胃癌细胞增殖、侵袭能力及活体模型种植瘤生长的影响，为靶向VEGFR2信号通路的胃癌治疗提供理论基础。 方法： 1、分别应用实时定量PCR、Western blotting法检测不同胃癌细胞系中 VEGFR2的表达情况。 2、构建靶向沉默VEGFR2的VEGFR2-shRNA和VEGFR2过表达真核表达质粒VEGFR2-pcDNA3.1。 3、应用CCK-8比色法检测调控VEGFR2的表达对胃癌细胞增殖能力的影响。 4、应用Transwell侵袭实验检测调控VEGFR2的表达对胃癌细胞侵袭能力的影响。 5、应用粘附实验检测调控VEGFR2的表达对胃癌细胞粘附能力的影响。 6、应用流式细胞术检测调控VEGFR2的表达对胃癌细胞周期的影响。 7、应用活体成像技术检测调控VEGFR2的表达对活体模型种植瘤生长的影响。 结果： 1、胃癌细胞中VEGFR2 mRNA和蛋白的表达显著上调。 2、MKN-45细胞中VEGFR2-shRNA转染组的VEGFR2 mRNA及蛋白表达显著下调。 3、VEGFR2表达下调可显著抑制MKN-45细胞的增殖、侵袭、粘附能力，阻滞细胞周期于G2/M期。 4、SCH细胞中VEGFR2- pcDNA3.1转染组的VEGFR2 mRNA及蛋白表达显著上调。 5、VEGFR2表达上调可显著促进SCH细胞的增殖、侵袭、粘附能力，促进G0/G1期和S期的细胞数量增加。 6、VEGFR2表达下调可显著抑制活体模型种植瘤生长。 7、VEGFR2表达上调可显著促进活体模型种植瘤生长。 结论： 血管内皮细胞生长因子受体2（ VEGFR2）在胃癌细胞中的表达显著上调。VEGFR2基因过表达在胃癌获得侵袭、转移表型的过程中起关键作用，对促进胃癌侵袭、转移具有重要意义。 第三部分干预VEGFR2对下游信号通路的生物信息学研究 目的： 研究干预VEGFR2后对下游信号通路的影响。 方法： 通过人表达谱芯片分析干扰 VEGFR2后对下游信号通路，并通过生物信息学研究筛选出有价值的下游分子。 结果： 1、芯片数据可靠，重复性好，KD组和NC组之间差异较大。 2、芯片数据显示上调基因数37，下调基因数19。 3、生物信息学分析发现，经典通路分析显示：NGF Signaling是显著富集排名第一的信号通路。上游调控因子分析显示：MAPK1被预测为强烈激活，IFNA2被预测为强烈抑制。明显激活的相关功能大致有： glucose tolerance，2.401， cell cycle progression，1.091；疾病与功能分析显示：有明显抑制的功能有：cell death of connective tissue cells，-1.583，cell death of fibroblasts，-1.486等。互作网络分析显示：排名第一的网络图主要影响了Endocrine System Development and Function, Cardiovascular System Development and Function, Tissue Development。并且预测VTN是有价值的下游信号分子。 结论： 推测目的基因有价值的下游分子在MKN-45人胃癌细胞上调控NGF Signaling通路，调控下游信号分子VTN，并提示该基因在binding of endothelial tissue、glucose tolerance和cell death of connective tissue cells等疾病和功能中发挥作用。 第四部分 VEGFR2通过调控VTN促进胃癌生长、转移的机制研究 目的： 探讨VEGFR2通过调控VTN促进胃癌生长、转移的机制。 方法： 1、分别应用实时定量PCR、Western blotting法检测不同胃癌细胞系中 VEGFR2和VTN的表达情况。 2、分别应用实时定量PCR、Western blotting法检测调控VEGFR2的表达对胃癌细胞VEGFR2和VTN的表达情况。 3、分别应用实时定量PCR、Western blotting法检测共调控VEGFR2和VTN的表达对胃癌细胞VEGFR2和VTN的表达情况。 4、应用CCK-8比色法检测共调控VEGFR2和VTN的表达对胃癌细胞增殖能力的影响。 5、应用Transwell侵袭实验检测共调控VEGFR2和VTN的表达对胃癌细胞侵袭能力的影响。 结果： 2、胃癌细胞中VEGFR2和VTN mRNA和蛋白的表达趋势一致。 2、干扰VEGFR2可抑制MKN-45细胞中VTN的表达。过表达VEGFR2可上调SCH细胞中VTN的表达。 3、共干扰 VEGFR2和 VTN可抑制 MKN-45细胞中 VTN的表达。共过表达VEGFR2和VTN可上调SCH细胞中VTN的表达。 4、共干扰VEGFR2和VTN可抑制MKN-45细胞的增殖能力。共过表达VEGFR2和VTN可促进SCH细胞的增殖能力。 5、共干扰VEGFR2和VTN可抑制MKN-45细胞的侵袭能力。共过表达VEGFR2和VTN可促进SCH细胞的侵袭能力。 结论： VEGFR2在胃癌细胞中调控VTN的表达。并通过正向调控VTN的表达促进胃癌细胞的生长、转移。