研究背景炎症与肿瘤密切相关。在能够导致肿瘤发生、发展的诱因中,炎症和慢性感染尤其吸引人们的注意。临床资料统计得知,肝的慢性炎症与肝癌的发生有着很强的相关性,肝细胞癌的发生率与慢性肝炎的发生率呈正相关。酒精性脂肪肝、肝炎、肝硬化等慢性肝损伤引起的肝的炎症反应能够促进肝癌的发生和发展,但具体作用机制尚未完全明确。在体内,炎症刺激会引起一些能够引起免疫耐受的细胞因子的释放,这些细胞因子与肿瘤的发生和发展有着密切的联系。据相关报道,促炎性细胞因子、炎性细胞因子(IL-1b、IL-6等)在胃癌、胰腺癌、肺癌等癌患者血清中剧烈升高,体内外研究已经证实这些炎症因子可以促进癌细胞增殖和肿瘤转移。脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分,位于细胞壁的最外层,又称内毒素。在细菌性感染及急慢性炎症发生时,LPS起重要的作用,可以刺激炎症因子和氧自由基的释放,而这些细胞因子及氧自由基与肿瘤的发生和进展有密切关系。最新研究发现,肠道微生物分泌LPS能够通过门静脉到达肝脏组织,引起炎症反应和激活肝星状细胞和肝细胞,促进肝癌发生。但LPS能否直接作用于肝癌细胞引起其生物学行为的改变仍不清楚。大量文献报道,白藜芦醇能抗氧化应激、抗炎、抗癌、抗衰老等,具有广泛的生理及药理学作用。白藜芦醇能够缓解关节炎和自身免疫疾病的炎症反应及降低免疫应答。白藜芦醇能够拮抗多种器官炎症,抑制促炎细胞因子生成,进而改善器官功能和修复炎症损伤。白藜芦醇还能够抑制多种肿瘤细胞的增殖与转移,有很广阔的临床应用前景。白藜芦醇抗肿瘤作用与其本身的生理及药理学功能密切相关,其机制可能与白藜芦醇能够阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、促进肿瘤细胞分化、干扰相关信号转导通路、抗肿瘤血管生成等有关。但其抗炎、抗肿瘤的具体机制仍未明确。研究目的本研究旨在探讨脂多糖对人肝癌细胞增殖与侵袭转移的影响,观察炎症反应中ppar-γ、tgf-β、p21、bcl-2等基因的表达变化,以及白藜芦醇在对脂多糖诱导的肝癌细胞增殖与侵袭转移的作用,为进一步探讨炎症反应与肿瘤的关系提供依据。方法1.采用噻唑蓝(mtt)比色法检测浓度分别为0μg/ml、1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的lps在不同时间内对hepg2、smmc7721细胞增殖的影响。。2.划痕实验分别观察0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml的lps浓度对hepg2、smmc7721细胞迁移的影响。3.transwell小室分别检测0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml药物浓度对hepg2、smmc7721细胞侵袭能力的影响。4.实时荧光定量pcr(q-pcr)检测浓度为0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml的lps干预后,hepg2、smmc7721细胞相关基因mrna表达量的变化。5.在20μg/ml脂多糖干预的同时,联合使用不同浓度的白藜芦醇(50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l)共同作用于肝癌细胞smmc7721,观察不同浓度白藜芦醇对脂多糖诱导的肝癌细胞smmc7721增殖、侵袭转移以及有关目的基因mrna的表达水平的影响。结果1.mtt结果显示,lps能够促进smmc7721的增殖,且随lps浓度的增加和作用时间的延长,促进作用明显加强,各组间比较差异有统计学意义(p<0.01)。低浓度的lps对hepg2细胞无促进增殖或抑制作用,各组间比较差异无统计学意义(p>0.05)。高浓度的脂多糖(40μg/ml)对hepg2、smmc7721均有抑制增殖的作用。2.划痕实验结果显示,不同浓度的脂多糖作用于smmc7721细胞24h后,smmc7721细胞迁移能力增强,且随药物浓度增大,迁移作用逐渐增强,lps浓度为20μg/ml时作用最强。而对于hepg2,脂多糖无促进迁移作用。3.transwell实验结果显示,lps作用smmc7721细胞24h之后,侵袭细胞数较对照组明显增多,且lps浓度越高发生侵袭的细胞数越多(p<0.01)。而使用不同浓度lps干预hepg2细胞,hepg2细胞侵袭个数没有明显变化,差异无统计学意义(p>0.05)。4.qpcr结果提示,不同浓度lps作用smmc7721细胞48h后,bcl-2、tgf-β表达水平均有不同程度的升高(p<0.01),而ppar-γ、p21基因mrna表达水平与不含lps组比较均有不同程度的下降,差异有统计学意义(p<0.01)。lps作用hepg2细胞24h后ppar-γ、tgf-β基因mrna表达水平有所下降(p<0.01),p21、bcl-2的mrna表达水平与无lps组相比无明显差异(p>0.05)。5.使用不同浓度白藜芦醇与20μg/mllps共同作用于肝癌细胞smmc7721,mtt结果显示,不同浓度白藜芦醇均能不同程度的抑制lps诱导的smmc7721细胞的增殖;且随白藜芦醇浓度的增加,抑制smmc7721细胞增殖效应增强(p<0.01)。划痕实验结果显示,白藜芦醇能够抑制lps诱导的smmc7721细胞迁移;transwell小室实验结果显示,lps作用的同时,加入不同浓度白藜芦醇,smmc7721细胞的侵袭细胞数较对照组明显减少,且白藜芦醇浓度越高发生侵袭的细胞数越少(p<0.01)。qpcr结果提示,不同浓度白藜芦醇作用于smmc7721细胞48h后,bcl-2、tgf-β表达水平均有不同程度的下降(p<0.01),而ppar-γ、p21基因mrna表达水平与只加lps组比较均有不同程度的升高,差异有统计学意义(p<0.01)。结论1.脂多糖可促进smmc7721的的增殖、侵袭与转移。2.脂多糖可显著上调smmc7721bcl-2、tgf-βmrna表达水平,下调ppar-γ、p21mrna表达水平。3.脂多糖对hepg2细胞的增殖、侵袭与转移无影响,但能改变ppar-γ、tgf-β基因的mrna表达水平。4.白藜芦醇能够抑制脂多糖诱导的smmc7721细胞的增殖、侵袭与转移。5.白藜芦醇抑制脂多糖诱导的smmc7721的的增殖、侵袭与转移可能与白藜芦醇能够促使抗凋亡基因bcl-2、细胞因子tgf-βmrna表达水平下调,ppar-γ、p21mrna表达水平上调有关。