【摘 要】
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目的探讨shRNA干扰靶向抑制高尔基体P115基因的表达对人胃癌细胞BGC-823侵袭能力的影响,以及可能涉及的分子机制。方法将pGPU6/GFP/Neo/P115-1318稳定转染胃癌细胞BGC-823,倒
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目的探讨shRNA干扰靶向抑制高尔基体P115基因的表达对人胃癌细胞BGC-823侵袭能力的影响,以及可能涉及的分子机制。方法将pGPU6/GFP/Neo/P115-1318稳定转染胃癌细胞BGC-823,倒置荧光显微镜观察并计算转染效率,经Western-blot和RT-PCR检测转染前后P115蛋白和基因的表达,评估抑制效果;Western-blot和细胞免疫荧光化学检测转染前后MIF,MMP2,MMP9的蛋白表达情况,RT-PCR检测基因表达水平,细胞划痕实验和Transwell体外侵袭实验检测转染前后BGC-823细胞侵袭运动能力的变化。结果成功将pGPU6/GFP/Neo/P115-1318稳定转染至胃癌BGC-823细胞中,48h后平均转染率约68%;与两组对照组细胞(空白对照组和shNC阴性对照组)相比,P115shRNA组细胞的P115、MIF、MMP2、MMP9的蛋白和基因表达水平都明显降低(P<0.05);细胞划痕实验和Transwell小室体外侵袭实验显示,与两组对照组细胞相比,稳定转染pGPU6/GFP/Neo/P115-1318重组质粒的胃癌BGC-823细胞的侵袭细胞数也显著减少(P<0.05)。结论在人胃癌细胞BGC-823中,干扰抑制P115的表达以后,可能通过下调MIF、MMP2、MMP9的表达抑制肿瘤细胞的侵袭运动。
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