VEGF是生物体内具有重要生物学作用的生长因子。该生长因子直接或间接地调控着牛卵母细胞成熟与早期胚胎发育。本研究利用体外受精、免疫荧光、激光共聚焦扫描以及RT-PCR等技术,探讨了牛早期胚胎发育过程中VEGF与其受体Flt-1蛋白及mRNA的表达。在此基础上,通过添加不同浓度VEGF,观察该生长因子对牛体外受精胚胎早期发育的影响。研究结果如下: 1.在牛卵丘-卵母细胞复合体、未成熟卵母细胞、2-细胞期胚胎、8-细胞期胚胎、桑椹胚及植入前囊胚中均能检测到Flt-1蛋白与mRNA。Flt-1蛋白集中分布于各发育阶段胚胎卵裂球细胞膜及近膜下区域,在卵母细胞胞质中也能看到其特异表达。表明Flt-1的表达具有时序连贯性。 2.VEGF蛋白与mRNA仅表达于牛卵丘-卵母细胞复合体、卵母细胞与体外受精囊胚中。免疫荧光染色结果显示,VEGF蛋白主要定位于未成熟卵母细胞与囊胚滋养层细胞的细胞膜及膜下区域。在2-细胞期、8-细胞期以及桑椹胚期胚胎中,未检测到VEGF蛋白与mRNA,表明VEGF的表达具有时空上的特异性。 3.在体外受精胚发育培养液中添加不同浓度的VEGF,对照组与添加1ng/ml、5ng/ml、10ng/mlVEGF的各实验组卵裂率分别为61.99%、75.69%、76.81%、68.92%;8细胞期发育率分别为51.82%、61.21%、65.41%、63.40%;囊胚发育率分别为27.74%、24.85%、23.90%、22.88%;囊胚孵化率分别为5.11%、4.85%、5.66%、3.27%。实验组与对照组相比,卵裂率、8-细胞期与囊