目的:探讨在1型糖尿病情况下,CD8α+基因表达的蛋白对胰岛细胞免疫反应所起的作用,从而探讨1型糖尿病的发病机理。从NOD小鼠胸腺淋巴细胞中克隆CD8α+基因,与慢病毒载体进行重组,构建CD8α+基因克隆的表达载体,并进行序列分析鉴定,然后经脂质体转染HEK293细胞,获得病毒原液再行感染树突状细胞,使DC细胞能够表达CD8α+抗原蛋白,最后经过Western Blot法检测CD8α+基因的表达。方法:设计CD8α+基因特异性引物,从NOD小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,RT-PCR法扩增CD8α+基因,与pCDF1-MCS2-EF1-COPGFP质粒载体重组构建表达载体,DNA序列测定确定正确序列后,并协同慢病毒表达载体pPACKH1TM Lentivector共转染HEK293细胞,包装好重组病毒后,收获病毒原液用来感染DC细胞,Western Blot法检测CD8α+基因的表达情况。结果:经过RT-PCR法扩增得一条长度约为750bp的目的条带,目的基因与pCDF1-MCS2-EF1-COPGFP构建重组质粒,成功将CD8α+基因克隆到相关载体,与基因文库中的小鼠CD8α+基因进行同源性比较,正确率为100%。协同慢病毒表达载体在细胞系HEK293中进行病毒包装,经细胞培养发现,荧光显微镜下可见HEK293细胞内有绿色荧光蛋白表达,收集病毒原液感染DC细胞,荧光显微镜下同样可见DC细胞内有绿色荧光蛋白表达;Western Blot方法分析得出CD8α+基因的表达产物。结论:分别经DNA序列测定,免疫荧光和免疫印记方法的分析,已成功将CD8α+克隆到相关载体内,为后续用于1型糖尿病免疫机制作用的研究奠定了基础。