广西十种优质品种鸡IFN-γ和IL-2基因的克隆及IFN-γ表达与活性研究

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γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-2(IL-2)是鸡体内重要的细胞因子,在鸡抗病和免疫应答反应中占有重要地位。本研究首次将广西十种优质品种鸡外周血淋巴细胞在刀豆蛋白A(Con A)的刺激下体外培养16h后,提取淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术扩增出鸡IFN-γ和IL-2的cDNA,克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果显示:广西十种优质品种鸡Y一干扰素基因都编码145个氨基酸的成熟蛋白,分子量约为16.8kD,与哺乳动物和其他品种鸡核苷酸序列的同源性分别为38.8%-40.6%、99.2%-100%,氨基酸的同源性为23.6%-29.1%、97.6%-99.4%,克隆的鸡白细胞介素2基因都编码143个氨基酸的成熟蛋白,分子量约为16.3kD,与哺乳动物和其他品种鸡核苷酸序列的同源性分别为25.2%-30.3%、98.6%-99.8%,氨基酸的同源性为14.6%-16.7%、96.5%-99.3%.为了克隆编码IFN-γ成熟蛋白基因,设计一对引物,将鸡IFN-γ插入pGEX-4T-1载体上,构建了原核表达质粒pGEX-mIFN-γ,并转化大肠杆菌BL21,以EcoRI和Sa/I双酶切筛选鉴定转化子,用IPTG诱导融合蛋白表达。通过SDS-PAGE和Westernblot分析,发现pGEX-m IFN-γ在42.4kD处出现融合蛋白条带,证实鸡IFN-γ基因得到了正确转录和表达。首次采用F48E9 NDV标准强毒株,测定IFN-γ蛋白抗病毒的活性为1.33×10<4>U/ml,深入研究IFN-γ的生物学效应,为基因工程干扰素和抗病免疫制剂的研制开发奠定了良好的基础。
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