铜绿微囊藻化感物质的分离鉴定

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随着水体富营养化现象及由此导致水华蓝藻大规模暴发,蓝藻取代绿藻成为优势种,目前急需探索蓝藻暴发的原因并寻找控制方法。目前对蓝藻分泌的化感物质的分离鉴定已成为研究热点和难点。  已有的研究结果可知滇池蓝藻优势种铜绿微囊藻对数期的胞外分泌物化感作用最强,本文将铜绿微囊藻培养至对数生长期藻密度为6*106个/ml时收获分泌物。利用分泌物添加法选取其中最敏感的藻种作为受体藻,大量培养铜绿微囊藻胞外分泌物,运用“系统溶剂提取-活性跟踪法”进行铜绿微囊藻分泌物中活性物质的分离、提纯、鉴定及其抑藻效果系列研究。结果表明:  (1)对三种绿藻的化感效应,发现对蛋白核小球藻、雨生红球藻和四尾栅藻的抑制率分别为-4.01%、6.20%和32.54%。选定对铜绿微囊藻胞外分泌物较为敏感的四尾栅藻为受体藻。  (2)采用液-液萃取法将铜绿微囊藻收获后的胞外分泌物初步分离为石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和萃取后水相四个部分,其中石油醚萃取得到的膏体对藻生长没有影响,正丁醇萃取得到的膏体对藻细胞数显著抑制(P<0.05),抑制率为5.83%,乙酸乙酯萃取得到的膏体抑藻效果最明显,极显著抑制藻细胞数(P<0.01),抑制率达到27.65%,约是正丁醇萃取层抑制率的5倍。  (3)三种溶剂相比较,乙酸乙酯可以最有效的将活性物质萃耳义出来,半致死浓度18.27mg/L。进一步经柱层析分离、薄层层析(TLC)、活性跟踪,分离得到一个化合物,结构鉴定为对羟基苯甲酸乙酯,72h-EC50=8.48mg/L。  (4)研究人工合成对羟基苯甲酸乙酯的抑藻效果,该化合物明显抑制藻细胞数量及叶绿素a含量,并破坏四尾栅藻细胞膜的完整性72h-EC50=8.13mg/L。  (5)铜绿微囊藻化感活性物质对羟基苯甲酸乙酯通过破坏叶绿素及细胞膜的完整性实现对四尾栅藻的抑制,这和滇池藻类演替趋势相符。  从铜绿微囊藻胞外分泌物中分离纯化得到的对羟基苯甲酸乙酯化感活性较好,对今后铜绿微囊藻化感物质的分离鉴定有一定的指导意义。
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