通过本实验,研究从蜂蜡中通过皂化制备并纯化蜂蜡素的工艺,比较两种重结晶法的特点,确定较优工艺,同时建立测定蜂蜡素中烷醇含量的方法和测定蜂蜡素中溶剂残留量的方法。1、比较过滤、灰化、脱脂、重结晶处理蜂蜡,对蜂蜡素粗品质量的影响,结果表明过滤、灰化、脱脂及重结晶处理蜂蜡对蜂蜡素粗品质量影响不明显。研究了皂化的最优反应时间、反应温度、乙醇浓度、固液比及碱的用量,并比较相转移剂及超声波辅助对皂化的影响,确定皂化的最佳条件为反应时间1 h、反应温度80℃、乙醇浓度85%、固液比1:5 g·mL-1、NaOH浓度35 g·L-1,且相转移剂和超声波对皂化反应影响不显著。2、以乙醇处理方式、蒸馏水用量、水溶液pH、搅拌时间及干燥方式为考察因素,研究蜂蜡素粗品提取的最佳工艺,结果表明不处理乙醇、加入5 mL·g-1的蒸馏水、调节pH至1,搅拌45 min,自然风干得到的蜂蜡素粗品质量最好。逐一考察乙酸乙酯、乙酸丁酯、正庚烷、丙酮及乙酸乙酯-正庚烷混合溶剂对粗品的重结晶效果,筛选得到乙酸乙酯,最佳液固比为70 mL·g-1,通过考察析晶时间、析晶方式及析晶温度,确定最优析晶条件为在15℃下自然冷却析晶2 h。通过单因素分析,考察依次以乙酸乙酯和正庚烷重结晶时,该两种溶剂的用量对蜂蜡素质量的影响,得到乙酸乙酯最佳液固比为20 mL·g-1,正庚烷最适液固比为45 mL·g-1。3、验证前面的工艺,确定仅乙酸乙酯重结晶时,制得的蜂蜡素中三十烷醇含量为58.3%,两烷醇含量为67.4%,收率31.9%;依次使用乙酸乙酯、正庚烷重结晶时,制得的蜂蜡素中三十烷醇含量为67.7%,两烷醇含量为78.1%,收率26.7%;两种工艺制得的蜂蜡素,其溶剂残留量均符合药典附录要求。4、建立了蜂蜡素中二十四烷醇、二十六烷醇、二十八烷醇、三十烷醇和三十二烷醇的含量测定方法及溶剂残留量的测定方法。通过方法学考察,表明建立的测定方法操作简便,灵敏度高,精密度和准确度较高,重现性、分离效果和选择性好,可满足样品的分析测定要求,完善了蜂蜡素溶剂残留量的测定方法,为控制蜂蜡素质量提供了方法和依据。