为延缓主要淡水养殖病原菌——嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对恩诺沙星的耐药性,以嗜水气单胞菌ATCC 7966为研究对象,评价了其对恩诺沙星、氟苯尼考、盐酸多西环素、复方硫磺间甲氧嘧啶钠和硫酸新霉素等抗菌药物的敏感性;并以恩诺沙星为受试药物,对ATCC 7966进行低浓度耐药性诱导,获得最小抑菌浓度(MIC)提高了128倍的耐药性菌株。选择具有抑菌作用的茉莉花、薄荷叶、连翘等26种中草药对嗜水气单胞菌耐药性进行延缓试验,结果显示:板蓝根、射干、苦参、大青叶、车前草、连翘、黄芩及艾草8种中草药均具有延缓嗜水气单胞菌对恩诺沙星的耐药效果。进而对其进行复筛,结果表明,连翘延缓耐药性的作用效果最为显著,经过20代接种后,连翘实验组的耐药性只上升了2倍(对照组上升了16倍)。利用转录组的法,分析了连翘延缓嗜水气单胞菌对恩诺沙星耐药的作用机制,将ATCC7966作为参考基因组,对照组和实验组分别得到4 288 304和3 741 410高质量的reads,且两组均有98%比对到参考基因组注释区。两组之间共有1 043个差异基因,其中有829个基因呈现明显上调,214个基因明显下调。差异基因通过GO功能注释到细胞功能、生物学过程和分子功能,分析结果显示:连翘影响到了耐药菌的细胞过程、膜部分、催化、代谢、分子功能与转运过程。KEGG分析结果表明:差异基因主要富集在细菌的代谢途径、ABC转运代谢、碳氮代谢、细菌趋化性等过程,连翘也显著影响了耐药菌的三羧酸循环、糖酵解及氨基酸的生物合成等途径。总之,连翘影响了嗜水气单胞菌耐药菌的多个生物学过程,推测主要通过氨基酸代谢、糖酵解、碳氮代谢途径,以及与耐药菌应激相关的ABC转运、趋化性途径影响耐药菌的生长达到对耐药性的控制效果。为探讨连翘3种主要有效成分对嗜水气单胞菌耐药菌作用效果,及其对药物主动外排系统中耐药节结化细胞分化家族(Resistant Nodule cell Differentiation family,RND)的影响,测定了连翘及其与恩诺沙星联合作用对嗜水气单胞菌耐药菌MIC的变化及生长情况的影响,及连翘3种主要有效成分:连翘苷、连翘酯苷A和连翘酯苷B作用耐药菌前后耐药程度的变化;利用相对实时荧光定量的方法,检测了RND关键的3个调控基因aheA、aheB、aheC表达量的变化。结果显示与连翘、恩诺沙星单品相比,两者联合作用可以更大程度地抑制耐药菌生长;连翘3种有效成分对耐药菌均有不同程度的抑制作用,并且随其浓度的不同而作用效果迥异,其中1.0mg/mL连翘脂苷A的作用效果最为显著;且连翘酯苷A作用后RND的3个基因均下调,其中aheA基因差异最显著。总之,可将连翘和恩诺沙星联合使用对嗜水气单胞菌进行防控,连翘脂苷A可显著抑制恩诺沙星耐药性的产生,此结果为细菌耐药性的防控及连翘延缓耐药性作用机制的研究提供理论依据。