背景和目的自身免疫性疾病是由于正常免疫耐受功能受损导致免疫细胞及其成分对自身组织结构和功能的破坏，并出现一定临床表现的一类疾病。自身免疫性疾病累及全身各个系统，种类多达40余种，而且大多为慢性疾病。尽管具有一些共性，如常呈慢性发作、多发于女性、血清中存在特异或非特异性自身抗体、激素或免疫抑制剂治疗有效，但其发病机制仍是众说纷纭，临床治疗效果不甚理想。各种研究表明，免疫自稳失常就会导致自身免疫性疾病的发生，并且是多种免疫细胞共同作用的结果，而T细胞在许多自身免疫性疾病发病中则起着关键性的作用。 近年的研究成果表明，在很多自身免疫性疾病病灶部位的淋巴细胞中，其TCR-αβV基因谱的构成均有偏移，而这种偏移则可能是由每种疾病的共同自身抗原决定簇结合自身MHC表型的限制性引起的。如果能将某种自身免疫性疾病中针对某共同抗原决定簇的TCR有效地封闭起来，应能对该病起到一定的治疗作用。目前研究已经尝试的针对TCR的治疗方法包括T细胞疫苗、TCR肽疫苗、TCR核酸疫苗、抗TCR单体克隆抗体治疗等。其中，TCRDNA疫苗是将编码致病性T细胞表面的TCR的部分基因插入真核表达载体构建重组质粒，再注入体内，被宿主细胞所摄取，通过宿主的转录、翻译系统合成蛋白。表达的蛋白不仅能诱导宿主CD4+T细胞介导的体液免疫应答，而且还能诱导CD8+T细胞介导的细胞免疫应答。该类疫苗从兴起至今已有十几年的历史，但对研究结果的报道并不多见。 类风湿性关节炎是一种病因尚未完全明确的慢性自身免疫病。研究证实该病的发生与病变部位浸润的自身反应性T细胞密切相关，T细胞在发病早期可直接造成炎症反应或辅助体液免疫应答。直接抑制类风湿性关节炎的自身反应性T细胞是治疗该病的根本措施之一。以往有用抗T细胞表面抗原CD4、TCR的单克隆抗体和免疫抑制剂等进行治疗的研究和临床应用，虽有一定疗效，但均属非特异性疗法，会造成机体T细胞功能的全面抑制。特异性治疗是一个发展方向。对该病用TCRVβDNA疫苗进行治疗的报道不多见。 本工作研究TCRVβDNA重组质粒的构建和表达。本实验室使用大鼠胶原诱导性关节炎动物模型，已分析出优势致病性T细胞克隆型为TCRVβ8.2和TCRVβ5.2。再拟以此为基础构建TCRDNA重组质粒，并探讨其作用效果及机理，以期为类风湿性关节炎的治疗提供新的思路。 实验方法及结果方法：从正常Lewis大鼠脾中分离出淋巴细胞，提取总RNA，用RT-PCR的方法分离得到编码TCRVβ8.2和TCRVβ5.2的基因片段，将目的DNA同真核表达载体pTARGET质粒进行连接，形成重组质粒；再用蓝白斑筛选、菌落PCR等方法进行初步筛选，最后对基因序列进行测序，选出连接方向和序列均正确的克隆；对筛选出的pTARGET-TCRVβ8.2和pTARGET-TCRVβ5.2重组真核表达质粒，在βalb/c小鼠骨骼肌和COS-7细胞中检测其在体内外的表达情况。 结果：在获得TCRVβ8.2和TCRVβ5.2目的基因并同pTARGET质粒载体连接后，测序鉴定证实TCRVβ8.2和TCRVβ5.2基因被正确插入到pTARGET载体中，并检测到在肌肉组织中的转录和重组蛋白的表达及在COS-7细胞内重组蛋白的表达。 结论：成功构建了重组真核表达质粒pTARGET-TCRVβ8.2和pTARGET-TCRVβ5.2，为进行下一步的TCRVβDNA疫苗对CIA大鼠保护作用的研究奠定了基础。