mTOR上调PFKFB3的分子机制及其功能研究

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jw____
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)在细胞增殖、生长、代谢、蛋白合成和血管生成方面有重要作用。mTOR异常激活在肿瘤中十分常见,成为人们关注的焦点。抑癌基因磷酸酶和张力蛋白同源物(Phosphatase and tensin homolog,PTEN)、结节性硬化症复合物基因1(Tuberous sclerosis complex gene 1,TSC1)和结节性硬化症复合物基因2(Tuberous sclerosis complex gene 2,TSC2)突变失活或缺失;癌基因磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase,PI3K),蛋白激酶B(Protein kinase B/AKT,PKB/AKT)的突变激活,都会导致mTOR的活化从而促进肿瘤的发生发展。但mTOR导致肿瘤发生具体机制尚未完全清楚。方法通过小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)进行研究,包括PTEN缺失的小鼠胚胎成纤维细胞(Phosphatase and tensin homologue null MEFs,Pten-/-MEFs)及其对照细胞(Pten+/+MEFs)和TSC2缺失的小鼠胚胎成纤维细胞(Tuberous sclerosis complex 2 null MEFs,Tsc2-/-MEFs)及其对照细胞(Tsc2+/+MEFs)。基因芯片分析PFKFB3在mTOR活化的MEFs中mRNA变化。然后用蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)检测mTOR活化的细胞中PFKFB3蛋白水平的变化。在JASPAR网站上预测PFKFB3上的转录结合位点,以此探究mTOR调节PFKFB3的具体机制,发现在PFKFB3启动子上存在缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的转录结合位点。siRNA干扰实验抑制HIF-1α表达后,通过WB观察PFKFB3蛋白水平的改变。为进一步探究HIF-1α与PFKFB3的关系,进行加药模拟缺氧来观察PFKFB3随HIF-1α的变化情况。为了证实HIF-1α是否在转录水平调控PFKFB3,我们通过荧光素酶报告基因实验来进行检测。最后我们在mTOR活化的细胞中研究PFKFB3的功能。通过用病毒敲低PFKFB3以及在细胞中加入其抑制剂PFK15,进行细胞增殖、转移以及成瘤能力的检测。并且联合使用PFKFB3抑制剂PFK15和mTOR抑制剂雷帕霉素(rapamycin)观察用药疗效的差异。结果基因芯片分析结果显示,mTOR活化的细胞中,PFKFB3在四种同种型(PFKFB1-4)中表达最高,与对照细胞相比PFKFB3表达均显著升高(P<0.05)。通过siRNA干扰和WB证实,HIF-1α正向调控PFKFB3。通过荧光素酶实验证实,HIF-1α与PFKFB3启动子上的转录结合位点结合促进PFKFB3的转录。由此可见,mTOR是通过HIF-1α上调PFKFB3的。体外实验结果显示,当抑制PFKFB3活性时,细胞的增殖、转移以及克隆形成的能力明显降低。体内实验表明,抑制PFKFB3可以减弱肿瘤的成瘤能力。联合使用PFK15和rapamycin,检测mTOR活化的肿瘤细胞的增殖能力以及克隆形成的能力,发现联合用药比单独用药有更好的抑制效果。结论mTOR通过HIF-1α上调PFKFB3的表达。PFKFB3可以促进细胞的增殖、转移以及成瘤的能力。并且联合使用PFK15和rapamycin比单独用药效果更加明显。
其他文献
中国法治建设的70年,是探索有中国特色社会主义法治道路的70年。70年来,在中国共产党的领导下,中国人民经过几代人的不懈努力,建成了中国特色社会主义法律体系,法治理念、法
目的:子宫颈癌是女性第二大致死性疾病。全世界每年约有50万新发病例,仅次于乳腺癌。因宫颈癌筛查的全面开展,其发病率大大降低。子宫颈癌的发生是涉及多种因素、多个步骤的
<正>党的十八大以来,教育系统围绕"培养什么人、怎样培养人、为谁培养人"这一根本问题,立德树人,全面推进教育改革发展。教师作为教育的实施者,肩负着为国家培养人才的重任,
在我国许多煤矿由于采区内工作面回采常采用跳采接续方式,普遍存在孤岛工作面,由于孤岛工作面存在应力集中,矿压显现较一般工作面剧烈,来压强度相比较常规工作面高,常规的巷
随着信息化的发展和普及,电子数据越来越多的被运用到刑事检察中。监察法施行和刑事诉讼法修改后,刑事检察中电子数据收集呈现出明显的特点:有限性、补充性、可控性和秘密性
随着社会经济的高速增长,石油天然气资源的应用与消耗在日益加大,常规石油天然气与勘探已进入末期阶段,非常规石油天然气的开采日益受到关注。岩性结构致密、低孔隙度低渗透率、天然能量产能低、气藏压力系数小等是非常规致密砂岩储层的典型特征,开采相对困难。研究低渗透率致密储层的特点及控制条件,并对其建立有效地评价和估算模型,是我国石油天然气勘探开发领域的核心内容。本论文通过已有的资料和文献调研,研究吉木萨尔凹
钙钛矿太阳能电池(PSCs)由于光电转换效率高、制备成本低、易于大面积制造等优点受到世界各国科学家们的广泛关注,新型功能界面材料的开发与合理设计对提高PSCs的光伏性能有
校本课程开发是专业性、技术性较强的活动,也是一个持续的、动态的、协同的过程。随着基础教育课程改革的不断深入发展,校本课程开发与实践也将越来越受到重视。本文共分为六
基于供给侧结构性改革和"双创经济"现实背景,指出双创教育具有长期性、适应性和完善性,双创教育内涵涉及创新创业基地、实践和运用的表层,创新创业认识、思考和探索的中间层,
新媒体时代下,技术的发展与进步使得新的媒体形式如雨后春笋般涌现,新媒体为动画的艺术的表现演绎提供了更宽广的舞台,同时也为动画在广告中的应用开辟了多元化的发展方向。