碳量子点荧光探针的制备及其在水中痕量Hg2+检测中的应用

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碳量子点(Carbon quantum dots,CDs),简称碳点,是近年发展起来的一种新型的荧光碳纳米材料,与传统的半导体量子点相比,CDs具有荧光稳定性高、生物相容性好和易于功能化等优点,因而在生物成像、细胞标记、传感检测等领域有广泛的应用前景。基于此,本文通过制备两种荧光碳量子点,对其形貌结构及光学性质进行了表征,并基于荧光共振能量转移(FRET)原理,将CDs应用于水中痕量Hg2+的检测。论文主要由以下几个部分组成:一、以无水柠檬酸为碳源、NaBH4为还原剂、氨水为钝化剂,经过碳化、还原和钝化三个步骤制备了水溶性良好的氨基化碳量子点(N-CDs),对还原与钝化过程中涉及的反应条件包括还原剂用量(0.25 g)与还原时间(2 h)、钝化反应的温度(160oC)和钝化时间(5 h)及氨水的用量(530μL)进行了优化。通过透射电子显微镜(TEM)对制备的N-CDs进行形貌表征,发现N-CDs的粒径在3–5 nm之间。以硫酸奎宁为参比物,测得N-CDs荧光量子产率约为36%。试验发现,Hg2+对N-CDs具有选择性地荧光猝灭作用。因此,将N-CDs用于水中Hg2+含量的检测,线性范围为0.1–1.2μmol L-1,检出限为20 nmol L-1。通过在自来水加标试验,加标回收率在83.1–98.0%之间,方法的准确性通过氢化物发生原子荧光光谱(HG-AFS)法进行验证。结果表明,所制备的N-CDs可作为荧光探针用于水中Hg2+的检测。二、为进一步提高碳点荧光探针对Hg2+检测的灵敏度,在N-CDs制备的基础上,以无水柠檬酸为碳源、尿素为氮源,当无水柠檬酸与尿素各为0.5 g时,通过一步水热法(160oC、4h)可制备荧光性能更加优异的氮掺杂碳量子点(NCDs)。TEM的结果表明,NCDs平均粒径约为2.4 nm,荧光量子产率达42.5%(以硫酸奎宁为参照)。同样地,所制备的NCDs对Hg2+也具有很强的选择性FRET响应,线性范围为0.05–5μmol L-1,检出限7.3 nmol L-1,利用NCDs对自来水和湖水中Hg2+进行检测,加标回收率在81.7–98.2%之间,表明此NCDs荧光探针可用于水环境中痕量Hg2+的检测。三、基于核酸适体(ssDNA)胸腺嘧啶(T)碱基对Hg2+具有很强的特异性结合能力。以NCDs为荧光探针,将富含T碱基的ssDNA与NCDs在偶联剂EDC/NHS作用下通过酰胺缩聚反应,形成NCDs-ssDNA偶联的荧光检测探针,利用氧化石墨烯(GO)与ssDNA的结合,使检测探针的荧光猝灭。当体系中存在Hg2+时,Hg2+与ssDNA中T碱基的特异性结合,使荧光恢复。试验发现,所制备的NCDs-ssDNA荧光探针在Hg2+浓度为1–9 nmol L-1范围内具有线性响应,检出限达到0.24 nmol L-1,自来水中Hg2+加标回收试验,回收率在80.3–91.8%之间,实现了对水中痕量及超痕量Hg2+的检测。
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