【摘 要】
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研究目的:研究跨膜蛋白205（Transmembrane protein 205,TMEM205）通过调控肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages,TAMs）极化减弱胃癌（Gastric Cancer,GC）对顺铂（Cisplatin,DDP）敏感性的分子机制,为临床DDP耐药提供新的治疗靶点。材料方法:1.MTT实验检测SGC-7901细胞和SGC-7901/D
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研究目的:研究跨膜蛋白205（Transmembrane protein 205,TMEM205）通过调控肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages,TAMs）极化减弱胃癌（Gastric Cancer,GC）对顺铂（Cisplatin,DDP）敏感性的分子机制,为临床DDP耐药提供新的治疗靶点。材料方法:1.MTT实验检测SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性。2.Western Blot和免疫荧光实验检测SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞的干性特征。3.建立SGC-7901细胞或SGC-7901/DDP细胞与THP-1细胞共培养体系,Western Blot、免疫荧光和流式细胞术实验检测SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞对TAM/M2极化的影响。4.The Human Protein Atlas、CCLE、Ualcan和TIMER等数据库检索TMEM205在GC中的表达情况及与GC临床病理参数之间的相关性。5.Western Blot实验检测TMEM205在GES-1细胞、SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞中的表达情况。6.MTT、Ed U、克隆形成、Western Blot和免疫荧光实验检测TMEM205对SGC-7901/DDP细胞增殖和干性的影响。7.细胞划痕、Transwell、微管形成和Western Blot实验检测TMEM205对SGC-7901/DDP细胞迁移和GC血管形成能力的影响。8.Western Blot和免疫荧光实验检测TMEM205对SGC-7901/DDP细胞上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。9.建立SGC-7901/DDP细胞与THP-1细胞共培养体系,Western Blot、免疫荧光和流式细胞术实验检测TMEM205对TAM/M2极化的影响。10.Western Blot和免疫荧光实验检测TMEM205对SGC-7901/DDP细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果:1.Western Blot和免疫荧光实验结果显示,与SGC-7901细胞相比,SGC-7901/DDP细胞中干性标志物表达上调（P＜0.05或P＜0.01）。2.Western Blot、免疫荧光和流式细胞术实验结果显示,与SGC-7901细胞相比,SGC-7901/DDP细胞诱导M2型巨噬细胞（TAM/M2）标志物的表达（P＜0.05或P＜0.01）。3.生信分析数据库结果显示TMEM205在包括GC的多种肿瘤组织中高表达,并与GC临床病理参数之间具有相关性（P＜0.05或P＜0.01）。4.MTT、Ed U、克隆形成、Western Blot和免疫荧光等实验结果显示,沉默TMEM205抑制SGC-7901/DDP细胞的增殖,并下调SGC-7901/DDP细胞中干性标志物的表达（P＜0.05或P＜0.01）。5.细胞划痕、Transwell、Western Blot和微管形成实验结果显示,沉默TMEM205抑制SGC-7901/DDP细胞的迁移、HUVECs的管腔形成,下调SGC-7901/DDP细胞中VEGF、MMP2和MMP9的表达水平（P＜0.05或P＜0.01）;Western Blot和免疫荧光实验结果显示,沉默TMEM205后SGC-7901/DDP细胞中上皮标志物的表达上调,间质标志物的表达下调,抑制SGC-7901/DDP细胞的EMT进程（P＜0.05或P＜0.01）。6.Western Blot、免疫荧光和流式细胞术实验结果显示,共培养体系下沉默SGC-7901/DDP细胞中TMEM205后,THP-1细胞中CD206的表达下调,CD86和i NOS的表达上调,THP-1细胞中CD206+/CD68+细胞数减少,CD86+/CD68+细胞数增加（P＜0.05或P＜0.01）。7.Western Blot和免疫荧光实验结果显示,沉默TMEM205后SGC-7901/DDP细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达下调（P＜0.05或P＜0.01）。结论:TMEM205通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进SGC-7901/DDP细胞增殖、干性、迁移、血管生成和EMT进程。此外,TMEM205通过诱导TAM/M2极化进一步促进SGC-7901/DDP细胞的恶性演进。
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