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研究背景与目的:卵巢癌是常见的女性生殖系统恶性肿瘤,其病因不明,且易转移及复发,致使卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤第一位,严重威胁着女性的健康和生命。因此,探索卵巢癌侵袭转移的分子机制,从而制定出靶向治疗卵巢癌的有效措施将极大提高患者的预后。近年来Hedgehog(HH)信号通路已成为恶性肿瘤研究领域的重要靶点,该信号通路的异常活化能够导致包括卵巢癌在内的多种恶性肿瘤的发生、发展。因此深入挖掘HH信号通路促进卵巢癌侵袭转移的分子机制,为卵巢癌患者的早期诊断和及时治疗,提高患者的生存率提供理论依据。本课题组前期工作通过对卵巢癌SKOV3细胞进行基因芯片分析、Western Blot、RT-PCR、Transwell侵袭实验和划痕实验等实验手段发现MMP7可能是Hedgehog信号通路的下游靶基因,HH信号通路可能通过其终末转录因子GLI2调控MMP7的表达影响卵巢癌的侵袭迁移能力。为了进一步发掘HH信号通路调控MMP7的表达影响卵巢癌的侵袭及转移的分子机制,本研究从细胞水平、分子水平及组织水平多层次探索Hedgehog信号通路促进卵巢癌侵袭转移的分子机制,证明Hedgehog信号通路是通过其终末转录因子GLI2(神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白2,Glioma-associated oncogene2)调控下游靶基因MMP7(基质金属蛋白酶-7,matrix metallopeptidase7)的表达促进卵巢癌的侵袭与转移,最终为实现卵巢癌的靶向药物治疗提供理论基础和科学依据。研究方法:1、培养卵巢癌SKOV3细胞,合成CHIP-MMP7引物,用染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)检测Hedgehog信号通路的终末转录因子GLI2与其下游基因MMP7启动子DNA区域是否具有相互作用,探索Hedgehog信号通路的终末转录因子GLI2是否直接调控MMP7的表达促进卵巢癌的侵袭与转移。2、利用临床标本,通过免疫组化技术检测人正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、卵巢癌中GLI2与MMP7表达水平及GLI2与MMP7在卵巢癌中的表达水平是否具有相关性。3、将免疫组化实验得出的结果进行分析,研究卵巢癌组织中转录因子GLI2和基质金属蛋白酶MMP7表达水平与临床病理特征的相关性。结果:1、通过CHIP实验发现,GLI2组(PCR模板为GLI2一抗处理后抽提的DNA,PCR引物为CHIP-MMP7)扩增出了MMP7基因启动子区的-8629 to-8457该段序列,说明转录因子GLI2与MMP7基因的启动子区域DNA结合促进MMP7的表达;Input组(PCR模板为未加一抗处理后抽提的DNA,PCR引物为CHIP-MMP7)作为PCR的阳性对照,可正常扩增MMP7基因启动子区的序列;IgG组(PCR模板为IgG一抗处理后抽提的DNA,PCR引物为CHIP-MMP7)作为阴性对照未见扩增产物。2、卵巢癌中转录因子GLI2及基质金属蛋白酶MMP7蛋白表达均强于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤,且GLI2与MMP7在卵巢癌中的表达水平呈正相关。3、转录因子GLI2与基质金属蛋白酶MMP7的表达水平在晚期卵巢癌(III/IV期)组织中均明显高于早期卵巢癌(I/II期),差异具有统计学意义(P<0.05);GLI2与MMP7的表达水平在淋巴转移组均比非淋巴转移组明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);而GLI2与MMP7蛋白的表达水平均与卵巢癌的病理分级、组织学类型、有无腹水无关,差异无统计学意义(P>0.05)。说明GLI2与MMP7在卵巢癌组织中的表达水平与临床病理特征的关系具有一致性,且晚期卵巢癌(III/IV期)和伴随淋巴转移的卵巢癌组织中GLI2与MMP7的表达水平都显著增加。结论:Hedgehog信号通路终末转录因子GLI2通过调控MMP7的表达促进卵巢癌的侵袭及转移。