背景 神经胶质瘤相比于其它颅内原发性肿瘤而言,其发病率最高,且患者预后不良比例大。传统中草药作为天然产物,其对人体毒性低,且没有太大副作用,因此近十余年广泛受到研究者和患者的关注。传统医学的主流观点是肿瘤常系热毒引起,因此中药治疗肿瘤常选择清热解毒类药物。黄连因其清热解毒作用较强,常被作为首选药物来与其它中草药配伍治疗肿瘤。但是中药黄连对颅内神经胶质瘤抑制作用的研究在国内外并未见到详细研究及报道。据此,我们通过体内外实验,系统地探研黄连对胶质瘤的抑制作用。方法 体内实验:以Balb/c鼠为体内实验研究对象,采取U87胶质瘤细胞的皮下接种进而成移植瘤为模型,以PBS为黄连用药组的空白对照组,将已建立的裸鼠移植瘤模型随机分为用药的黄连组以及用PBS的空白对照组,均予以灌胃给药,共计一月余,观察肿瘤生长速度,肿瘤直径三天测量一次,并分别统计不同组的生存曲线,分析黄连抑制胶质瘤生长的效果。体外实验:体外实验采用人胶质瘤U251和U87细胞,将对数生长期的U251和U87细胞分为黄连用药组和不用药的对照组。增殖抑制MTT法检测中药黄连对各种不同胶质瘤细胞的生长作用;克隆增殖实验检测中药黄连对胶质瘤细胞成瘤的干预作用;细胞划痕实验检测不同浓度的中药黄连分别对U251和U87胶质瘤细胞爬行能力的影响;流式细胞术检测不同浓度的中药黄连分别对U251和U87胶质瘤细胞周期的影响,以及对细胞凋亡的干预作用;Western Blotting检测中药黄连对胶质瘤内STAT3磷酸化水平,HDAC3水平以及Caspase3凋亡蛋白的干预作用。结果 实验结果显示:(1)在人胶质瘤U87细胞的异种移植模型中,中药黄连用药组与用PBS处理的对照组相比,黄连用药组能够显著抑制胶质瘤移植瘤的生长,同时U87移植鼠经黄连治疗后,其生存期明显延长。(2)经中药黄连治疗后,胶质瘤细胞的增殖明显受到抑制,且其作用与剂量和时间均相关。VPA呈时间依赖性的抑制胶质瘤细胞的增殖。黄连处理小鼠小胶质BV2细胞,在24h干预下,黄连对小鼠小胶质BV2细胞没有显著的抑制作用,说明黄连对小胶质细胞并无明显的毒性作用。(3)平板克隆形成实验显示:与对照组相比,胶质瘤细胞经中药黄连治疗后,形成的克隆数目明显减少,在0.625 mg/ml的黄连治疗浓度时,只有少数的克隆增殖(P﹤0.05),在1.25 or 2.5 mg/ml时克隆不发生增殖(P﹤0.001),说明中药黄连能显著抵抗胶质瘤细胞的增殖。(4)细胞划痕结果显示:与未经处理的对照组相比,经中药黄连处理后,U87和U251胶质瘤细胞的爬行和迁移能力明显降低。(5)细胞凋亡流式术显示:中药黄连能够导致细胞周期发生阻滞,促进胶质瘤细胞坏死和凋亡,随浓度增加对胶质瘤的作用增强。(6)Western blot实验显示:VPA和中药黄连均能够下调STAT3的磷酸化水平以及HDAC3蛋白的表达。同时中药黄连能够下调胶质瘤细胞凋亡蛋白Caspase 3水平。结论 研究发现:中药黄连对U87移植瘤的生长有抑制作用,经中药黄连处理后,移植瘤裸鼠的生存期明显延长;中药黄连和VPA均能对抗胶质瘤细胞的生长,其中黄连亦能对抗胶质瘤细胞的成瘤能力;中药黄连对胶质瘤细胞系的迁移能力有显著的抑制;黄连显著抑制细胞周期,诱导胶质瘤细胞发生坏死和凋亡;黄连可能与VPA功效一致通过下调HDAC3的水平,从而抑制STAT3磷酸化,进而影响胶质瘤细胞的生物进程。综上,阐明黄连可多角度抑制胶质瘤细胞,其作为一种传统中药,有望在临床对胶质瘤的治疗中发挥更大的作用。