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本论文正文由三部分组成,第一部分为毛茛总苷抗心肌缺血作用研究。第二部分为毛茛总苷依内钙/依外钙研究。第三部分为毛茛总苷中总黄酮的含量测定方法研究。 第一部分毛茛总苷抗心肌缺血作用研究 第一节毛茛总苷对大鼠离体心肌缺血-再灌注损伤的保护作用 目的:观察毛茛总苷对大鼠离体心肌缺血-再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、I/R组、毛茛总苷0.05、0.10、0.20 mg/ml组。采用Langendroff大鼠离体心脏灌流系统,停灌30 min,复灌40 min,建立心肌缺血-再灌注损伤模型。记录停灌前、复灌后1、5、10、20、30、40 min时的心率(HR)、左室收缩压(LVSP)、左室收缩压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室舒张压最大下降速率(+dp/dtmax)、冠脉流量(CF)等心功能指标;测定复灌后20 min、40 min灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性;采用氯化三苯基四氮唑(TTC)进行心肌染色并计算心肌梗死面积百分比。结果:与正常对照组相比,I/R组复灌后1、5、10、20、30、40 min时HR、LVDP、±dp/dtmax、CF明显降低,LDH、CK水平升高,心肌梗死面积达58.78%;毛茛总苷0.10、0.20 mg/ml剂量组可以不同程度地降低心肌梗死面积,明显升高缺血-再灌注损伤心脏的LVDP、±dp/dtmax,并增加CF,降低冠脉流出液中LDH、CK的水平。结论:毛茛总苷具有减慢心率、舒张冠状动脉等作用,推测其可能通过增加冠脉血流量,改善心肌缺血缺氧,减轻心肌细胞损伤,起到保护缺血-再灌注导致的心肌损伤。 第二节毛茛总苷对急性心肌缺血大鼠心电图的影响 目的:观察毛茛总苷对垂体后叶素(Pituitrin,Pit)诱发的大鼠急性心肌缺血心电图的影响。方法:通过大鼠舌下静脉注射 Pit来复制大鼠急性心肌缺血模型,观察模型组、阳性对照组(硝苯地平组)、毛茛总苷50、150 mg/kg剂量组在注射垂体后叶素后5 s、15 s、30 s、60 s、3 min、5 min、10 min心电图中T波峰值及心率的变化。结果:与模型组比较,毛茛总苷150 mg/kg剂量组能显著降低急性心肌缺血大鼠心电图T波峰值变化率,对抗Pit所致的心率减慢。结论:毛茛总苷对Pit诱发的大鼠急性心肌缺血有的保护作用。 第二部分毛茛总苷依内钙/依外钙研究 第一节毛茛总苷对大鼠离体胸主动脉依内钙/依外钙研究 目的:观察毛茛总苷对大鼠离体胸主动脉的舒张作用并探讨其对内钙、外钙的影响。方法:采用大鼠离体胸主动脉环灌流方法,观察毛茛总苷0.003、0.006、0.012 mg/ml对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱发血管平滑肌收缩的影响;观察在无钙和复钙情况下,毛茛总苷对NE诱发血管平滑肌收缩的影响。结果:毛茛总苷能拮抗NE诱发的血管平滑肌收缩作用,对NE所致的内钙释放诱发的血管收缩反应无明显影响,对复钙后NE所致的外钙内流诱发的血管收缩反应有显著性抑制作用。结论:毛茛总苷舒张血管的作用可能与受体操作的钙通道和抑制外钙内流有关。 第二节毛茛总苷对大鼠血管平滑肌细胞的依内钙/依外钙研究 目的:观察毛茛总苷对大鼠血管平滑肌细胞内钙、外钙的影响。方法:①采用Fluo-3/AM荧光探针标记血管平滑肌内钙,荧光倒置显微镜观察荧光强度。②采用荧光分光光度法测量细胞内钙的荧光强度,观察毛茛总苷对NE诱发细胞内钙升高的影响。③观察在胞外无钙的情况下,观察毛茛总苷对NE诱发细胞内钙升高的影响,以考察毛茛总苷对NE诱发内钙释放的影响。④在常钙情况下,采用Thapsigargin(TpG)耗竭细胞内钙后,观察毛茛总苷对NE诱发细胞内钙升高的影响,以考察毛茛总苷对NE诱发的外钙内流的影响。结果:定性分析表明,毛茛总苷能降低 NE引起细胞内荧光强度升高。②定量分析表明,毛茛总苷能降低NE引起细胞内钙升高。③在无钙情况下,毛茛总苷对NE诱导的内钙释放无明显影响。④在耗竭细胞内钙后,毛茛总苷对NE诱发的外钙内流有显著性的抑制作用。结论:毛茛总苷可抑制血管平滑肌细胞外钙内流,对内钙释放无明显影响。 第三部分毛茛总苷中总黄酮的含量测定方法研究 目的:建立毛茛总苷总黄酮的含量测定方法并测定总黄酮的含量。方法:以芦丁为对照品,采用可见-紫外分光光度法全波长扫描样品和对照品,确定测定波长;并考察其精密度、稳定性、重复性和回收率。结果:毛茛总苷与芦丁均于360.5 nm处有最大吸收峰。通过绘制标准曲线发现芦丁质量浓度在0.0081~0.0284 mg/mL范围内与吸光度线性关系良好,r=0.9996。精密度、稳定性、重复性的RSD(%)分别为:0.22、0.34、2.73;平均回收率均在95%~105%范围内,RSD(%)为1.97。毛茛总苷中总黄酮的含量为44.15%。结论:该方法简便、准确、可靠,适用于毛茛总苷中总黄酮的含量测定。