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夏季高温高湿的气候易使奶牛处于热应激状态,对其生理功能、内分泌系统、免疫系统、繁殖功能和生产性能都有不利影响。不同品种奶牛对热应激的耐受能力不完全一致,产生的后果也有所不同。本研究旨在比较热应激对荷斯坦牛和娟姗牛生理功能、血液生化指标、抗氧化能力、繁殖激素、免疫相关指标和瘤胃微生物及粪便微生物的影响。根据荷斯坦牛与娟姗牛组间胎次、泌乳天数相近以及组内产奶量相近的原则,于江苏某牛场选取20头荷斯坦牛和20头娟姗牛。试验奶牛的日粮结构、营养水平和生活环境相同,每日饲喂和挤奶均为两次,采用全混合日粮（Total mixed ration,TMR）饲喂,自由饮水。本试验于2020年8月和2021年1月进行,试验期包含两个阶段:热应激期（2020年8月）和非热应激期（2021年1月）,每个试验期连续测定7 d。试验期间连续测定牛舍内的环境温湿度,于每天13:00—16:00测定奶牛直肠温度和呼吸频率,每天记录奶牛的产奶量。在试验期最后一天,每头奶牛采集混合均匀的奶样50 mL,用于测定乳成分相关指标;用真空抗凝管,从奶牛尾静脉采血5 mL,用于血常规、免疫指标和抗氧化指标的测定;在晨饲后2 h,通过牛口腔导管采集瘤胃液50 mL,用于pH和瘤胃微生物16S的测定;戴无菌长臂手套,用直肠取粪法收集新鲜无污染的直肠内容物样本,用于粪便微生物16S的测定。用多因素方差法分析热应激对荷斯坦牛和娟姗牛生理功能、血液生化指标、抗氧化能力、繁殖激素、免疫相关指标的影响,应用16S rRNA高通量测序技术比较荷斯坦牛与娟姗牛瘤胃和粪便微生物的结构与组成。所得结果如下:（1）热应激对荷斯坦牛和娟姗牛直肠温度、呼吸频率有显著影响（P＜0.05）。热应激期间,荷斯坦牛（38.62℃）直肠温度比娟姗牛（38.12℃）高了 0.5℃,并达到了显著水平（P＜0.05）;荷斯坦牛和娟姗牛的呼吸频率无显著差异。在非热应激期间,荷斯坦牛和娟姗牛的直肠温度和呼吸频率均无显著差异（P＞0.05）。（2）热应激对荷斯坦牛乳糖率、尿素氮有显著影响,且热应激对娟姗牛乳蛋白率和乳糖率也有显著影响（P＜0.05）。在热应激条件下,娟姗牛乳脂率（7.38%）、乳蛋白率（3.99%）显著高于荷斯坦牛乳脂率（4.81%）和乳蛋白率（3.28%）（P＜0.05）;荷斯坦牛的日产奶量（22.36 kg）和乳糖率（5.02%）显著高于娟姗牛的日产奶量（16.16 kg）和乳糖率（4.75%）（P＜0.05）;在非热应激期,娟姗牛日产奶量和乳糖率显著低于荷斯坦牛（P＜0.05）;娟姗牛的体细胞数和尿素氮含量高于荷斯坦牛,但无显著差异（P＞0.05）。（3）热应激对荷斯坦牛和娟姗牛淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比和平均红细胞体积有显著影响（P＜0.05）。在非热应激期,荷斯坦牛红细胞计数（6.95 1012/L）和血红蛋白含量（110.42 g/L）显著高于娟姗牛的红细胞计数（6.21 1012/L）和血红蛋白含量（99.00 g/L）（P＜0.05）;荷斯坦牛的平均血红蛋白浓度（398.00 g/L）高于娟姗牛（319.53 g/L）,且达到显著水平（P＜0.05）。（4）热应激对荷斯坦牛和娟姗牛IL-1β、TNF-α有显著影响（P＜0.05）。在热应激期,娟姗牛TNF-α和IgG均比荷斯坦牛略高,但差异未达到显著水平（P＞0.05）。在非热应激期间,娟姗牛TNF-α（2599.56 pg/mL）显著高于荷斯坦牛（1948.19 pg/mL）（P＜0.05）,其余免疫指标差异均未达到显著水平（P＞0.05）。（5）热应激对荷斯坦牛和娟姗牛SOD、MDA和HSP70含量有显著影响（P＜0.05）。在热应激期,娟姗牛抗氧化指标均比荷斯坦牛高,但差异未达到显著水平（P＞0.05）;荷斯坦牛 HSP70（419.47 pg/mL）显著高于娟姗牛（315.76pg/mL）（P＜0.05）。非热应激期间,荷斯坦牛和娟姗牛的抗氧化指标和热休克蛋白差异均未达到显著水平（P＞0.05）。（6）瘤胃液16S测序结果表明:热应激对荷斯坦牛和娟姗牛瘤胃和粪便的α多样性有显著影响;热应激时娟珊牛瘤胃厚壁菌门的相对丰度显著高于荷斯坦牛。热应激显 著 降 低 了 Succiniclasticum、Lachnospira、Pseudobutyrivibrio 和RuminococcaceaeUCG-014等与纤维消化相关菌的相对丰度,可能与采食行为模式改变相关。（7）粪便16S测序结果表明,荷斯坦牛和娟姗牛粪便微生物优势菌门为厚壁菌门和拟杆菌门。热应激会使瘤胃球菌科微生物减少,导致肠道优势菌属发生改变,从而影响机体的营养吸收效率。LEfSe分析表明:热应激状态荷斯坦牛和娟姗牛粪便微生物丰度和多样性差异显著,荷斯坦牛粪便微生物丰度和多样性显著高于娟姗牛。综上所述,随THI升高,荷斯坦牛和娟姗牛呼吸频率显著升高;热应激期荷斯坦牛和娟姗牛乳糖和乳蛋白含量显著下降,但娟姗牛乳品质受热应激影响较小;在热应激状态下,娟姗牛免疫功能和抗氧化功能较强,耐热应激能力强于荷斯坦牛;荷斯坦牛和娟姗牛瘤胃和粪便中微生物组成存在着较大差异,热应激能够改变娟珊牛瘤胃厚壁菌门的相对丰度,降低了瘤胃与纤维消化相关菌属的相对丰度,并且使瘤胃球菌科微生物减少,导致肠道优势菌属发生改变,可能影响机体的营养吸收效率。