菌株Lactobacillus sp.Niu-O16是分自牛瘤胃胃液的革兰氏阳性严格厌氧细菌，该菌株在严格厌氧条件下能将底物黄豆苷原和染料木素分别还原为二氢黄豆苷原和二氢染料木素。经长期耐氧驯化，得到菌株Niu-O16的耐氧突变株Aeroto-Niu-O16，该耐氧突变株在有氧条件下生长时，会在菌体外壁形成一层以纤维素多糖为主要成分的抗氧化保护膜结构。本研究拟探讨耐氧突变株Aeroto-Niu-O16保护膜多糖提取方法，分析保护膜多糖中的单糖种类及比例，为进一步研究耐氧突变株保护膜形成机制奠定基础。通过正交试验确定耐氧突变株Aeroto-Niu-O16保护膜多糖适宜提取方法，对得到的样品分别用苯酚硫酸法、考马斯亮蓝法、间苯二酚法测定其总糖、蛋白、酮糖的含量，利用PMP柱前衍生高效液相色谱法进行单糖组分分析，并测定了胞外多糖DPPH、超氧阴离子和羟自由基的体外清除能力。结果如下:
　　(1)添加纤维素酶可以有效提取胞外多糖保护膜成分。单因素试验表明，最适提取温度为50℃;当纤维酶酶浓度为10mg/mL时，酶用量为5～20μL时，提取得到的总糖浓度随酶用量增加而增加，酶用量超过20μL后，提取得到的多糖总糖浓度不再增加;将提取时间从0.5h延长到1.5h后，提取得到的总糖浓度显著提高，但是继续延长提取时间，提取得到的总糖浓度无显著变化。通过正交试验极差分析可知三种因素对试验影响大小顺序为:提取温度＞酶用量＞提取时间;确定的最适提取条件为:提取温度50℃、酶用量20μL、提取时间2h，在最佳条件下提取得到的多糖浓度为44.8μg/mL。
　　(2)对提取得到的多糖样品进行组分分析。通过考马斯亮蓝法测定，发现多糖样品中含有7.6％的蛋白组分;样品的间苯二酚法鉴别试验为阳性，表明组分中含有酮糖，含量为9.4％。绘制高效液相色谱峰面积与单糖-PMP衍生产物浓度的标准曲线，对棉籽三糖进行了酸水解和PMP柱前衍生，利用高效液相色谱测定棉籽三糖单糖组分及比例，通过计算，发现测的单糖组分种类及比例与棉籽三糖实际结构完全相符，表明由本研究建立的酸水解、PMP柱前衍生和高效液相检测方法可行。对提取得到的耐氧突变株保护膜多糖样品进行酸水解，PMP柱前衍生后进行高效液相色谱检测，结果表明，耐氧突变株保护膜多糖主要由葡萄糖和半乳糖组成，摩尔比为葡萄糖∶半乳糖=1.02∶1。
　　(3)对提取得到的多糖样品进行抗氧化活性分析。研究结果表明，提取得到的保护膜多糖具有清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基能力，其中浓度为3mg/mL的多糖样品对DPPH自由基和羟基自由基的清除率分别为62.8％和43.9％，浓度为4mg/mL的多糖样品对超氧阴离子的清除率为32.6％。