论文部分内容阅读
[目的]
新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)是新生儿期发病率较高的疾病。研究发现,免疫紊乱及过度炎症反应是HIE脑损伤的主要机制之一,其中主要包括细胞因子,体液免疫因子,补体系统,白细胞分化抗原,粘附分子等,这为HIE的免疫学治疗提供了依据。免疫球蛋白在儿科疾病中的使用由来已久,1977年Pechadre用免疫球蛋白治疗过敏性疾病并伴有癫痫的患儿时,发现患儿的癫痫发作次数减少,因此第一次提出免疫球蛋白可能具有抑制癫痫发作、保护神经的作用。此后亦有较多研究将免疫球蛋白用于治疗HIE并取得疗效,但多为临床实验。本实验通过复制新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型,旨在研究缺氧缺血性脑损伤时炎症因子如抵抗素(Resistin)、白细胞介素-1β(IL-1β)和NF-κB p65信号的变化,以及免疫球蛋白对这些变化的作用,从而进一步为免疫球蛋白治疗HIE提供理论依据。
[方法]
1.建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型;
2.将120只新生7同龄SD仔鼠随机分为三大组,每个大组按照12h、24 h、72h、7d、14d时间点分为五个亚组,每亚组8只:
①假手术组(n=40);
②HIBD组(n=40)(腹腔内注射生理赫水,0.02ml/g.次,bidx2d)
③治疗组(n=40)(腹腔内注射免疫球蛋白,2.5 mg/g.次,bid×2d)
3.观察大鼠缺氧缺血性脑损伤后行为学改变;
4.观察大鼠病变侧脑组织大体形态学改变,并以甲醛固定,HE染色,观察显微镜下病理学改变;
5.以免疫组化方法检测病变侧脑组织切片中Resistin、IL-1β和NF-κB p65的改变。
[结果]
1.成功复制了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型;
2.HIBD组出现不同程度的行为异常。动物结扎对侧运动受损,肢体瘫痪,固定右旋是模型成功的行为学标志;
3.大体见HIBD组右侧大脑半球肿胀苍白,随时间推移肿胀有所减轻,14 d右侧大脑半球轻度萎缩,少数有液化形成;
4.HE染色见假手术组各时间点脑组织结构层次清晰,核居中,尼氏体均匀分布于核的周围,亦可见少量坏死细胞;HIBD组右侧大脑皮质可见神经元核固缩,细胞坏死、溶解、消失,逐渐出现胶质细胞增生及胶质瘢痕;
5.Resistin在假手术组有少量表达,各时间点之间差异无统计学意义(P＞0.05);在HIBD组表达12h开始增高,24h达到高峰,随时间其表达量逐渐减少。与假手术组各时间点相比,HIBD组和治疗组Resistin表达均增高,差异有统计学意义(P＜0.05);与HIBD组相比,治疗组12h、24h、72h、7d Resistin表达量减少,差异有统计学意义(P＜0.05),14d时差异无统计学意义(P＞0.05)。
6.IL-1β在假手术组有少量表达,各时间点之间差异无统计学意义(P＞0.05);在HIBD组表达12h开始增高,24h达到高峰,随时间其表达量逐渐减少。与假手术组各时间点相比,HIBD组12h、24h、72h、7d IL-1β表达均增高,差异有统计学意义(P＜0.05),14d时降至正常,差异无统计学意义(P＞0.05);治疗组12h、24h、72h IL-1β表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05),7d时降至正常,差异无统计学意义(P＞0.05)。与HIBD组相比较,治疗组12h、24h、72h、7d IL-1β表达量减少,差异有统计学意义(P＜0.05),14d时差异无统计学意义(P＞0.05)。
7.NF-κB p65在假手术组有少量表达,各时间点之间差异无统计学意义(P＞0.05);在HIBD组表达12h开始增高,24h达到高峰,随时间其表达量逐渐减少。与假手术组各时间点相比,HIBD组12h、24h、72h、7d NF-κB p65表达均增高,差异有统计学意义(P＜0.05),14d时降至正常,差异无统计学意义(P＞0.05);治疗组12h、24h、72h NF-κB p65表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05),7d时降至正常,差异无统计学意义(P＞0.05)。与HIBD组相比较,治疗组12h、24h、72h、7d NF-κB p65表达量减少,差异有统计学意义(P＜0.05),14d时差异无统计学意义(P＞0.05)。
[结论]
1.结扎一侧颈总动脉并吸入8％浓度的氧可成功复制缺氧缺血性脑损伤模型;
2.缺氧缺血性脑损伤早期上调了NF-kB p65信号及炎症因子Resistin、IL-1β的表达,证明炎症反应参与了缺氧缺血性脑损伤的病理生理过程;
3.免疫球蛋白通过下调NF-κB p65信号及炎症因子Resistin、IL-1β的表达,从而减轻缺氧缺血性脑损伤的炎症及病理反应;
4.抑制缺氧缺血性脑损伤时NF-κB p65的激活,减轻炎症反应引起的脑损伤可以作为治疗新生儿缺氧缺血性脑病的一条途径。