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目的NF-κ B通路是介导炎症和肿瘤的重要通路,通过干预NF-κ B通路可以对肿瘤的侵袭转移进行临床干预。本课题以自主建立的有骨髓转移的神经母细胞瘤细胞系(QDDQ-NM1)为对象,初步探讨NF-κB通路在神经母细胞瘤转移过程中的作用及其机制,进一步寻找NF-κB通路中的作用靶点,利用靶点开发特异性结合药物,治疗神经母细胞瘤,为神经母细胞瘤的治疗提供新途径。方法应用自主建立的国人神经母细胞瘤细胞系QDDQ-NM,利用NF-κB通路特异性激活剂、抑制剂对细胞系进行干预。NF-κB通路特异性激活剂肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)对细胞系进行干预(该组细胞为Ⅰ组),使NF-κB通路达到理论上的最大程度激活；空白对照组(Ⅱ组),利用同等量的细胞培养基培养,和不同干预的细胞组进行比较。NF-κB通路特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(Pyrrolidinedithiocarbamic acid,ammonium salt, PDTC)对细胞系进行干预(该组细胞为Ⅲ组),使NF-κB通路达到理论上的最大程度抑制。各组细胞均置于37℃,5%C02培养箱中培养48h。应用半定量RT-PCR检测不同干预措施细胞P65mRNA、CXCR4mRNA的表达。利用凝胶图像扫描仪条带灰度分析各组细胞P65mRNA、CXCR4mRNA的相对表达,从而分析P65mRNA、CXCR4mRNA在各组细胞中的表达变化,证实他们之间的联系；应用Western-blot蛋白印迹法检测不同干预措施细胞P65蛋白、CXCR4蛋白的相对表达,应用Quantity-One软件分析蛋白条带灰度值,得出各组P65蛋白、CXCR4蛋白相对表达,从而分析P65蛋白、CXCR4蛋白在各组细胞中的表达变化,证实他们之间的联系。Transwel1小室是检测肿瘤细胞体外转移侵袭能力的经典方法,利用Transwel1小室检测不同干预措施细胞的转移侵袭能力。在相同培养条件下通过观察各组细胞穿过ECM胶的细胞数来表示瘤细胞的转移侵袭能力,穿过ECM胶的细胞数目多,表示瘤细胞的转移侵袭能力强；反之,则侵袭转移能力弱。进而分析各组细胞干预的效果。结果RT-PCR结果示Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组,其P65mRNA相对含量分别为0.7211±0.2233；0.6002±0.1822和0.5553±0.0904即在各组细胞中都有P65mRNA表达,且Ⅰ组高于Ⅱ组,Ⅱ组高于Ⅲ组,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。CXCR4mRNA相对表达含量分别为0.4128±0.0176；0.3045±0.1910和0.1829±0.0091即在各组细胞中都有CXCR4mRNA表达,且Ⅰ组高于Ⅱ组,Ⅱ组高于Ⅲ组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果表明,Ⅰ组细胞在NF-κB通路最大程度激活时其NF-κB蛋白P65的mRNA高表达,其下游调节蛋白CXCR4mRNA也处于高表达状态；Ⅲ组细胞是在NF-κB通路抑制状态下,其NF-κB蛋白P65的mRNA表达明显较少,其下游调节蛋白CXCR4mRNA也处于低表达状态。与空白对照组细胞比较均有统计学意义。Western结果示Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组蛋白相对灰度值分别为：P65蛋白,0.9026±0.0375;0.8340±0.0379;0.8007±0.0793；CXCR4蛋白,0.9472±0.0193；0.9091±0.0216；0.6025±0.0384。各组间差异有统计学意义(P<0.05)。Western结果表明,Ⅰ组细胞在NF-κB通路最大程度激活时其NF-κB蛋白P65高表达,其下游调节蛋白CXCR4也处于高表达状态；Ⅲ组细胞是在NF-K B通路抑制状态下,其NF-κB蛋白P65表达明显较少,其下游调节蛋白CXCR4也处于低表达状态。与空白对照组细胞比较均有统计学意义。Transwell小室检测各组细胞侵袭力实验显示Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组细胞穿过ECM基质的细胞数分别为：55.8000±2.7749；46.6000±5.9414;30.2000±7.4967。各组间差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室实验结果表明,Ⅰ组细胞在NF-κB通路最大程度激活时,细胞穿过ECM胶的数目最多；Ⅲ组细胞是在NF-κB通路抑制状态下,细胞穿过ECM胶的数目最少。且与空白对照组细胞比较均有统计学意义。表明NF-κB通路能促进神经母细胞瘤的侵袭转移能力。结论神经母细胞瘤细胞系(QDDQ-NM1)细胞在NF-κB通路不同状态下其P65mRNA的表达与其下游基因CXCR4mRNA的表达呈正相关。神经母细胞瘤细胞系(QDDQ-NM1)细胞在NF-κB通路不同状态下其P65蛋白的表达与其下游基因CXCR4蛋白的表达呈正相关。NF-κB通路能够促进神经母细胞瘤细胞系(QDDQ-NM1)细胞在体外的侵袭转移；抑制NF-κB通路可以明显降低瘤细胞的转移侵袭能力。NF-κB通路能够促进神经母细胞瘤细胞系(QDDQ-NM1)细胞在体外的侵袭转移的机制是通过调节CXCR4的高表达来实现。通过抑制NF-kB通路可能成为治疗和干预神经母细胞瘤患儿的新途径。