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脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）是革兰氏阴性细菌内毒素的主要成分，也是革兰氏阴性细菌激发宿主免疫应答，导致机体损伤的重要因素。人体集聚革兰氏阴性杆菌最丰富的部位是肠道，其所产生的LPS经吸收首先到达肝脏，作为机体主要解毒器官的肝脏，无疑是清除LPS的最活跃场所，但也是免疫损伤的最常见靶位。LPS不但可加重肝硬化、酒精性肝病肝损伤，而且明显增强CCl4和乙醇等肝毒性物质的肝毒性，单独LPS亦可导致肝损伤。但LPS引起肝损伤过程中涉及的具体信号转导分子及效应分子尚不清楚。 本研究运用常规分子生物学和免疫组织化学方法，动态分析LPS刺激不同时段肝脏LPS／TLR4途径信号分子及功能分子TNF-α表达与肝脏病理变化的关系，同时比较LPS肝损伤发展不同时相蛋白质组变化，从蛋白质整体水平动态捕捉LPS肝损伤信号转导途径中的特异蛋白质“指纹”，搜查参与到该信号通道的信号、效应分子，探索LPS致肝损伤的发生机理。 首先，Balb／c鼠腹腔注射LPS建立急性内毒素血症动物模型，分别在3小时、6小时、12小时、24小时、30小时处死动物取肝脏组织，HE染色观察病理改变，免疫组织化学方法检测肝细胞凋亡禾月组织TNF－a的表达，逆转录PCR（RT－PCR）法检狈肝组织信号分子 1”LR。（Tolllike Receptor 4，TLR．）、MyD88（MyeloidDifferential Factor 88，MvD88）mRNA 7k平的表达。结果表明，腹腔注射 LPS后 0、 小时小鼠一般情况无明显改变，肝组织学变化不明显，24小时小鼠肝脏出现明显炎性浸润、坏死；而3～6 ’J’时肝细胞凋亡和肝组织 TNF－口的表达达到高峰，12小时即明显减少，24小时凋亡、坏死并存，以坏死为主；肝组织 TLR4mRNA的表达在注射LPS后3小时开始下调，6、12小时明显抑制，24小时则基本恢复：肝组织W088mRNA的表达在不同时间点变化不明显。 然后，本研究为探讨LPS诱发肝损伤相关蛋白质群的变化规律，动态分析了LPS刺激不同时段肝脏的蛋白质谱型。在上述动物实验基础上，匀浆抽提肝脏总蛋白进行双向凝胶电泳，从蛋白质表达丰度角度，寻找差异表达蛋白质；对差异表达蛋白质斑点胰酶酶解后用MALDITOF攸S作肽指纹图，结合蛋白质数据库搜索进行蛋白质鉴定，并分析各差异蛋白质在内毒素肝损伤中的作用。结果发现腹腔注射LPS后6 ’J’时(早期人 蛋白质谱显示TNF－a相关蛋白TNFAIPI（TNF－a inducible endothelial protein，TNFAIPI）表达明显上调，TRA IL受体2蛋白表达下调，线粒体相关蛋白MetaxinZ、TIMMSA（Mitochondrlal import Inner membranetranslocase subunit TIMS A，TIMMSA）开始表达上调，部分蛋白酶体相关蛋白质如磷脂酶AZ、PA28（proteasome activator 28，PA28）、MDPP（Maggesiumdependent protein phosphatase，MDPP） V等的表达被抑制；24小时（后期，包括30小时3只小鼠死亡）的蛋白质谱显示，TRAIL受体2表达抑制，线粒体相关蛋白MetaxinZ、TIMMSA达到表达高峰，蛋白酶体相关蛋白磷脂酶AZ、PA28、MDPP恢复表达，并开始表达增殖相关蛋白P34d＊激酶。 本研究结果提示，LPS致肝损伤呈时间依从性：早期，TNF－a相关蛋白出现表达高峰，线粒体凋亡途径相关蛋白质开始表达上调，出现以TNF－口为中心的肝细胞凋亡，肝组织TLR．mRNA的表达表现为抑制状态；中后期，线粒体凋亡途径相关蛋白质达到表达高峰，肝组织出现明显病理变化，凋亡和坏死并存，以坏死为主，同时机体开始启动损伤修复程序，肝组织TLR．mRNA的表达开始恢复，与肝脏的病理变化在时间上呈一致性，可能与LPS耐受性产生有关，提示LPS信号传导分子TLR．在介导肝损伤中起重要作用，而MmD88mRNA的表达在LPS刺激不同时限无明显变化，提示其为胞内保守信号分子。