刺激隐核虫病（Cryptocaryoniasis）俗称“海水鱼白点病”,是由一种专性寄生的海水纤毛虫——刺激隐核虫（Cryptocryon irritans,刺虫,下同）引起的。一般认为该虫能够感染大多数海水硬骨鱼,并造成养殖鱼体严重的组织损伤或继发性细菌感染死亡,对养殖业造成严重的经济损失。近些年来的研究揭示了刺激隐核虫病在不同条件下的爆发规律以及该病防治的措施,但目前仍旧没有广谱高效的能够应用于实际生产的解决办法。在本研究中通过降低养殖密度来降低白点病的爆发机率;并探究用铜合金材料防治刺激隐核虫病的可行性及机理,旨在找到一种环境友好、高效的刺激隐核虫病防治措施,以减少水产资源的损失和浪费。1养殖密度对海水鱼刺激隐核虫病发病规律和对寄主鱼应激的探究水产病害（包括刺激隐核虫病）的爆发在一定程度上跟水产动物的养殖密度是相关的。养殖密度的升高增加了鱼体之间的接触机率,同时也加快了疾病的传染和相互感染速度。在本研究中设计了四个养殖密度,从大到小分别为34.2 kg/m³,22.8 kg/m³,11.4kg/m³和5.7kg/m³。我们发现,随着养殖密度的增加,因刺虫的感染而死亡的大黄鱼的数量在第七天急剧增加,尤其是密度最高的实验组高达90%以上;而密度最低组,实验鱼的各方面状态依旧非常好。通过对不同养殖密度下大黄鱼进行基因表达分析可以看出,相较于低养殖密度组,高密度养殖导致鱼体肝脏中免疫相关基因差异表达,而且这些基因主要富集于鱼体的补体通路和凝血级联通路。说明密度胁迫刺激鱼体免疫系统的表达,鱼始终处于应激状态不利于其生长,更增加了其被病害感染的风险。2铜合金板在水产养殖中抗刺激隐核虫病效果的初步探究铜表面因具有良好的抗菌特性而被广泛应用于医疗器械和公共设施等方面。在水产养殖行业中,也有少量铜合金或镀铜网箱被应用于实际生产,且发现该养殖模式下鱼的发病率较低。为了证明铜合金能够有效抑制刺激隐核虫病的爆发,我们将含有74%-78%的铜合金板铺设在养殖鱼缸的底部,并移入人工感染刺虫的大黄鱼。研究发现,铜合金板有效地阻断了刺虫的生活史,并抑制了刺激隐核虫病的爆发,且鱼体表刺虫滋养体数量和大黄鱼死亡率显著降低;而且发现从铺设铜板的鱼缸中收集到的包囊（前体）的胞膜结构遭到破坏,内质模糊降解。在体外实验中,当刺虫包囊与铜板接触后,包囊内铜离子含量显著升高100多倍,但其DNA并未降解。同时还检测了实验鱼体和养殖水体中铜离子含量,结果显示均未超标。3铜合金板对刺激隐核虫细胞形态和生理生化指标的影响为了探明铜合金表面对刺虫的制毒机制,我们用刺虫细胞与铜合金板表面接触,在显微镜下观察其形态变化发现,包囊前体在5分钟内就出现了细胞破裂,内质外渗的现象,而包囊具有稍强的耐受性。检测了处理前后包囊细胞氧化还原酶和ATP酶活性的变化。结果表明,使用铜合金处理不同时间点后,刺虫包囊中MDA含量、CuZn-SOD和ATP酶活力均有显著影响。铜板处理后包囊内MDA含量表现出先上升后下降的趋势;细胞SOD活力显著升高;然而无论是Na⁺/K⁺-ATP酶或是Ca²⁺/Mg²⁺-ATP酶活力都显著下降了。这些研究进一步揭示了铜合金板表面杀刺虫的机理。4利用蛋白组技术分析铜合金板对刺激隐核虫包囊后的影响在本研究中,通过对铜合金表面处理过的刺虫包囊进行iTRAQ蛋白组学技术分析。结果显示,共识别蛋白629个（unique peptide>=1）,而差异表达蛋白142个;组间两两比较分析中,对照vs 0.5h处理组的差异蛋白数为91个（59上调,32下调）,对照vs 1h处理差异蛋白92个（42上调,50下调）,0.5h处理vs 1h处理差异蛋白43个（17上调,26下调）。对差异表达蛋白进行KEGG分析显示其主要富集于新陈代谢,基因信息加工,人类疾病和细胞过程类。然后用荧光定量PCR对蛋白质组学技术进行验证和差异蛋白基因表达变化进行分析。利用蛋白组学技术进一步揭示铜合金表面对刺虫的作用机制。