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催乳素受体(Prolactin receptor,PRLR)是单次跨膜的受体蛋白,催乳素通过它在脊椎动物中起着广泛的生理作用。为理解鹅PRLR的生理作用,我们应用RACE(Rapid amplifcation of cDNA ends)技术克隆了全长为3,159bp的鹅催乳素受体基因(Prolactin receptor gene,PRLR)cDNA并制备了PRLR兔抗鹅多克隆抗体,对洪泽湖鹅成体组织中mRNA及蛋白表达进行了分析。同时,对洪泽湖鹅PRLR5’-UTR内存在的一个SNP位点进行了验证。1.鹅催乳素受体基因克隆及基因组织表达克隆的鹅PRLR cDNA全长3,159bp,含443bp 5’-UTR.2,496bp编码区和220bp 3’-UTR,编码14个或以上外显子。预测鹅PRLR含831个氨基酸(Amino acid,aa),与鸡、鸽及火鸡PRLR同源性分别为87.7、85.2和84.8%,N-末端含一个24aa信号肽,胞外域含两个配体结合区。每个配体结合区内含二对半胱氨酸残基和一个WSEWS五肽WS基序。进化分析表明,鹅PRLR在进化中高度保守。克隆的cDNA序列比对表明,成年公鹅睾丸至少同时表达五种PRLR转录本。其中一种转录本由另一种转录本缺失第1外显子后95bp形成；第三种转录本由不同于以上二种转录本的另一启动子选择不同的转录起始点起动转录,产生一个新的第1外显子,并直接剪接到第3外显子而形成；第四种转录本缺失133bp的外显子4a而不编码或可能编码一种截短的PRLR蛋白异形体；第五种转录本是一种转录本异形体,编码的蛋白异形体类似于非禽类其它脊椎动物PRLR,即胞外域只含有一个配体结合区。RT-PCR结果表明,鹅PRLRmRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富。2.鹅催乳素受体多克隆抗体制备及受体组织表达构建的exPRLR-pET-28a(+)转化宿主菌E.coli Roster后,建立了可诱导的原核表达系统。在25℃培养、IPTG诱导条件下,表达催乳素受体胞外域重组蛋白exPRLR.超声波裂解菌液上清及包涵体中的exPRLR使用Ni亲和层吸柱纯化,并用纯化、复性的exPRLR免疫新西兰白兔,制备兔抗鹅exPRLR抗血清,硫酸铵沉淀抗血清获得多克隆抗体。然后多克隆抗体用原核表达的鹅PRLR胞外域重组蛋白及鹅组织表达的PRLR加以验证。同时,组织表达分析表明,成年母鹅组织中至少存在三种PRLR蛋白,它们或许是经典的PRLR蛋白及PRLR的蛋白异形体。3.鹅催乳素受体基因单核酸多态性及微量动物细胞基因组DNA提取液克隆的cDNA序列比对发现2个错配位点。位于编码区内的错配位点推测可能是一种沉默SNP,不改变蛋白序列；位于5’-UTR的错配位点在洪泽湖核心群内被证明是一个SNP。同时,结合鹅微量羽髓细胞基因组DNA提取,我们研发了一种微量动物细胞基因组DNA提取液及相应的提取方法。此方法实现了动物细胞基因组DNA的一步提取,过程简单,成本低廉；所提取的基因组DNA完整且没有耗损,可确保基因组DNA提取的一次成功。