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实验目的探讨从大鼠的脂肪组织中分离、培养脂肪干细胞（ADSCs）的方法及鉴定方法。并对在单层培养条件下用外源性转化生长因子TGF-β1定向诱导ADSCs分化为软骨细胞的可行性进行初步的探讨研究。为软骨组织工程研究中的种子细胞的选择提供一个新的思路。实验方法Wistar雄性大鼠处死,取腹股沟区及睾丸脂肪垫等处脂肪组织,清除小血管和结缔组织充分剪碎,加入0.15%的Ⅰ型胶原酶消化,离心后收集细胞置于孵箱中培养。2-3天换液一次去除未贴壁细胞,待贴壁细胞生长融合至80-90%时传代培养。应用倒置相差显微镜观察各代ADSCs形态学的改变,并用免疫荧光法检测传代ADSCs表面抗原CD29表达。取第3代生长良好的脂肪干细胞,分成两组:一组用含有TGF-β1的培养基定向诱导培养,另一组为对照组（空白组）用普通培养基继续培养,诱导两周后行Ⅱ型胶原免疫组化染色进行检测鉴定。结果1、脂肪干细胞的形态特点:原代培养的脂肪干细胞24小时左右即可见细胞贴壁,多数贴壁细胞呈小圆形,折光性强,其中散在少量的梭形细胞或多角细胞。3d后梭形细胞逐渐增多,可见核分裂相。5d后细胞呈团簇状生长,并形成集落。约7d左右细胞融合超过90%时进行传代,传代后细胞形态较为均一,呈长梭形,排列紧密,类似成纤维细胞。2、脂肪干细胞的鉴定:免疫荧光法检测脂肪干细胞（ADSCs）。结果显示细胞表面抗原CD29呈阳性表达,从而证实所培养细胞为干细胞来源。3、ADSCs向软骨细胞的定向分化:实验组细胞生长速度变慢,诱导第2天即可见少数单个细胞由梭形变为多边形,多角形,可见细长伪足,核周出现黑色颗粒,随诱导时间延长,形态发生如前变化的细胞逐渐增多。诱导第14天左右部分细胞开始变圆,细胞边界不清,核略呈偏位,核周颗粒密集,细胞逐渐聚集成团。4、诱导后细胞Ⅱ型胶原免疫组化检测:实验组在TGF-β1向软骨表型定向诱导后14d,Ⅱ型胶原免疫组化染色结果显示有部分细胞呈阳性,可见棕黄色颗粒分布于细胞胞浆内而对照组则为阴性。结论1、表面抗原CD29表达阳性,证实大鼠脂肪组织中存在干细胞来源细胞。2、从大鼠脂肪组织中可以分离出脂肪干细胞（ADSCs）,并且细胞在体外培养条件下生物学性状保持稳定。3、外源性转化生长因子TGF-β定向分化、定向诱导连续培养14d后,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性反应,表现出来软骨细胞的部分特性。证实脂肪干细胞具有向软骨细胞定向分化的能力。