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第一章CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ基因/蛋白表达与卵巢癌早期诊断生物功能关联的生物信息学分析目的:通过生物信息学方法发现并验证CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ基因/蛋白之间的内在关联,以及与卵巢癌、卵巢癌早期诊断的生物功能关联,构建CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ/PET-SUMO原核表达载体,诱导并纯化高纯度的蛋白。方法:(1)利用Gene MANIA工具(http://genemania.org/)分析CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ相关基因/蛋白之间的相互作用网络,利用Coremine医疗在线工具(http://www.coremine.com/)对CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ基因/蛋白生物过程进行注释;(2)连接CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ基因和PET-SUMO质粒载体,通过双酶切、测序鉴定,阳性质粒转化、表达BL21感受态细胞。通过IPTG和镍柱亲和层析法以及尿素变性-复性法诱导并纯化CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ/PET-SUMO重组蛋白。结果:(1)Gene MANIA生成了CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ基因/蛋白交互网络,6个基因/蛋白互为作用;卵巢癌、卵巢癌早期诊断和CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ基因/蛋白密切相关的生物过程被标注出来,表明它们与卵巢癌的早期诊断具有关联;(2)成功使CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ基因连接到原核表达载体PET-SUMO,经测序与Genebank中相应序列一致;(3)在不同条件下通过IPTG成功诱导CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ/PET-SUMO质粒在BL21感受态细胞中表达,镍柱亲和层析法得到纯化的可溶性蛋白 CCL18、CXCL1、C1D/PET-SUMO,尿素变性-复性法得到纯化的包涵体蛋白TM4SF1、FXR1、TIZ/PET-SUMO,并经过SDS-PAGE和Western-Blot验证为目的蛋白。结论:本研究成功找出CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ基因/蛋白之间的内在关联,以及其与卵巢癌、卵巢癌早期诊断的生物功能关联,并成功构建了CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ/PET-SUMO原核表达载体,成功的诱导、纯化了目的蛋白CCL18、CXCL1、C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ/PET-SUMO,经过SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白纯化的为目的蛋白且纯度较高。第二章多指标联合诊断卵巢癌液态悬浮芯片的临床验证目的:构建血清多指标联合检测诊断卵巢恶性肿瘤的液态悬浮芯片,检测血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、TM4SF1、FXR1、TIZ自身抗体的含量,验证液态悬浮芯片对卵巢恶性肿瘤的诊断效能。方法:(1)利用前期实验成功纯化的CCL18、CXCL1、C1D、TM4SF1、FXR1、TIZ重组蛋白,用相应抗原、抗体包被羧基化微球,构建血清多指标联合检测诊断卵巢恶性肿瘤的液态悬浮芯片。(2)利用液态悬浮芯片检测了320例卵巢恶性肿瘤患者、150例盆腔良性包块患者、100例健康女性以及肝癌、乳腺癌、肺癌、宫颈癌女性患者各100例血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、TM4SF1、FXR1、TIZ自身抗体的含量。(3)建立了联合检测六指标诊断卵巢恶性肿瘤诊断模型,比较联合检测六指标和单独CA125、HE4、CA19-9检测在诊断早期(Ⅰ-Ⅱ期)卵巢恶性肿瘤的效能。结果:(1)本实验构建了稳定的液态悬浮芯片检测系统。(2)构建了卵巢恶性肿瘤诊断模型。结论:联合检测六指标对卵巢恶性肿瘤的诊断效能优于单独CA125、HE4、CA19-9检测。联合检测六指标对早期(Ⅰ-Ⅱ期)卵巢恶性肿瘤的诊断效能优于单独CA125、HE4、CA19-9检测。第三章血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、TM4SF1、FXR1、TIZ自身抗体对判断卵巢上皮性癌化疗结局的初步探索目的:探索血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、TM4SF1、FXR1、TIZ自身抗体对判断卵巢上皮性癌患者铂类化疗敏感性及预后的影响。方法:利用液态悬浮芯片检测不同临床病理因素患者血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ抗体表达量,分析各指标在不同临床病理因素患者的差异,以及各指标表达量对卵巢上皮性癌患者铂类化疗结局的影响。结果:(1)血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ抗体表达量与临床病理因素的关系:各指标在以年龄大小、病理学类型、FIGO分期、分化程度、手术残留径大小临床病理因素分组患者中,结果比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)卵巢上皮性癌患者预后影响因素的单因素分析:结果发现预后与患者年龄大小、FIGO分期早晚、术后残留径大小相关;(3)卵巢上皮性癌患者预后影响因素的多因素分析:年龄大小、病理学类型、手术残留径大小是影响患者预后的独立因素,血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ抗体表达量不是影响患者预后的独立因素。(4)卵巢上皮性癌患者铂类化疗敏感性与FIGO分期、术后残留径大小、年龄大小有关,FIGO分期晚、术后残留径≥1cm、年龄大的患者,其耐药风险性增大。血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ抗体表达量与耐药风险无显著相关。结论:血清CCL18、CXCL1抗原和C1D、FXR1、TM4SF1、TIZ抗体表达量的单独分析不能用于判断患者化疗结局,联合多个指标同时分析可能是预测卵巢上皮性癌患者铂类化疗结局的一种方法。