目的:1比较微量肉汤稀释法及琼脂稀释法两种方法检测幽门螺杆菌抗生素耐药性的结果,探索更适用于临床的检测方法。2.测定甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素及利福平等六种药物对幽门螺杆菌最低抑菌浓度,计算耐药率,为临床抗Hp治疗提供理论依据,指导临床医生合理使用抗生素。　　 方法:美国临床实验室标准化研究所规定琼脂稀释法作为检测Hp抗菌药物敏感性的研究方法,但是这种技术费时费力、价格昂贵,我们运用简便易行的微量肉汤法进行对比研究。标本取自2009年08月至2010年02月在我院进行胃镜检查并做了幽门螺杆菌培养的慢性胃炎、消化道溃疡、胃食道反流及胃癌的病人220人,经胃镜活检,细菌鉴定培养,最终共分离菌株42株,取自42位病人。试验所需抗菌药物粉末均由sigma公司生产,所有的药物均在使用当天按照临床实验室标准化研究所(NCCLS)规定新鲜溶解和配制。用英国OXOID公司生产的MUELLER-HINTON肉汤(MH肉汤)作培养基进行微量肉汤稀释法检测幽门螺杆菌的耐药率。每株菌用一个灭菌的96孔聚苯乙烯板进行试验,第一排加甲硝唑;第二排加替硝唑;第三排加奥硝唑:第四排加左氧氟沙星;第五排加克拉霉素;第六排加利福平。第七排和第八排不加药,作对照试验。将奥硝唑、替硝唑、甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素及利福平有效浓度按倍比稀释的方法共配制成12个浓度,按由高浓度到低浓度的顺序依次加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中。将用直接菌悬液法制备的浓度相当于2.0麦氏比浊标准的菌悬液,经MH肉汤1:1000稀释后,依次加入96孔聚苯乙烯板每个孔中,然后将96孔聚苯乙烯板装罐,密封,用日本MART公司ANOXOMAT厌氧培养系统向密封罐中注入含有微氧的混合气体,最后将密封罐置35-37℃温箱中培养72小时。以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度定为MIC。当阳性对照孔(即不含抗生素)内细菌明显生长试验才有意义。当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时,应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔,则重复试验。将每个菌株同时进行琼脂稀释法检测药物耐药性。按NCCLS标准采用琼脂稀释法。药物配制方法同上,将药物按由高浓度到低浓度的顺序倍比稀释依次加到灭菌的琼脂培养基中,配制成含不同抗菌药物浓度的琼脂平板。将浓度相当于2.0麦氏比浊标准的菌悬液依次加入含不同药物浓度的琼脂平板上,每株菌液加2μ1。将琼脂平板装罐,密封,注入含有微氧的混合气体,置35-37℃温箱中培养72小时。以无菌生长的药物最低稀释度作为最低抑菌浓度(MIC)。每次试验用ATCC43504及/或ATCC43526质控菌株作参照。　　 统计学处理:用SAS9.0软件进行统计分析,采用配对卡方检验比较两种检测方法测得药物耐药率之间的差异,采用卡方检验比较六种药物耐药率之间的差异,计算x2值,P＜0.05为差异有统计学意义。计算每种药物的其几何平均数,MIC50和MIC90。　　 结果:(1)试验发现两种方法有良好的相关性,R值在0.87至0.96之间。经配对卡方检验,证实微量肉汤法和琼脂稀释法检测抗生素药物耐药率无明显差异,P＞0.05(x2=甲硝唑1.01、替硝唑0.09、奥硝唑0.01、左氧氟沙星1.00、克拉霉素0.97及利福平0.01))。(2)用微量肉汤稀、释法测得甲硝唑、替硝唑及奥硝唑耐药率分别为73.81％、71.43％、69.05％;经统计学分析,Hp对三种药物的耐药率无显著性差异,P＞0.05(x2分别为:甲硝唑与替硝唑:0.33,甲硝唑与奥硝唑:0.77,替硝唑与奥硝唑:0.20)),克拉霉素耐药率21.43％;(x2=0.07);左氧氟沙星耐药率23.81％,两种药物耐药率无显著性差异,P＞0.05。分析克拉霉素与甲硝唑耐药率之间有显著性差异,P＜0.05(x2=20.17);左氧氟沙星与甲硝唑耐药率之间有显著性差异,P＜0.05(x2=19.17);提示Hp对克拉霉素和左氧氟沙星耐药率低于对硝基咪唑类。利福平耐药率为O.明显优于其他抗生素。(3)用微量肉汤稀释法测甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素及利福平等六种药物MIC50依次为16μg/ml、16μg/ml、16.μg/ml、1μg/ml、O.5μg/ml、0.075μg/ml;MIC90依次为64μg/ml、64μg/ml、128μg/ml、32μg/ml、16μg/ml、0.125μg/ml;MICs(几何平均数)依次为12.09μg/ml、14.73μg/ml13.57μg/ml1.12μg/ml、0.64μg/ml、0.01μg/ml。(4)用琼脂稀释法测甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素及利福平等六种药物耐药率依次为76.19％、71.43％、69.05％、26.19％、19.05％、0;MIC50依次为16μg/ml、16μg/ml、16μg/ml、0.5μg/ml、0.125μg/ml、0.004μg/ml:MIC90依次为64μg/ml、128μg/ml、128μg/ml、32μg/ml、16μg/ml、0.0625μg/ml;MICs(几何平均数)依次为11.69μg/ml、12.70μg/ml、11.13μg/ml、0.8069μg/ml、0.33065μg/ml、0.005198μg/ml。　　 结论:1.用微量肉汤稀释法和琼脂稀释法检测Hp抗生素耐药率无明显差异,但微量肉汤稀释法因简便易行更适用于临床工作。2.Hp对甲硝唑、替硝唑、奥硝唑的耐药率较高,且有交叉耐药现象,因其严重耐药已不适合作为常规的推荐方案用药;克拉霉素和左氧氟沙星耐药率明显低于甲硝唑,可作为临床用药;所有幽门螺杆菌对利福平都敏感。3.幽门螺杆菌抗生素耐药率逐渐升高,提示治疗前体外抗生素敏感试验至关重要。