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急性肺损伤(ALI)是失血性休克后常见的器官损伤之一,发生率较高,探索防治ALI的措施对于救治重症失血性休克极为重要。失血性休克肠淋巴液(PHSML)是ALI发生的重要机制与关键环节之一,探寻靶向PHSML的措施对于防治失血性休克ALI具有积极的现实意义。最新研究表明星状神经节阻滞(SGB)对失血性休克后心肌损伤与功能障碍、肠黏膜高通透性与肠绒毛损伤、过度氧化应激反应和胃肠功能障碍均有一定的治疗作用。细胞自噬通过控制蛋白质和细胞器的降解,在细胞生长、发育和稳态维持过程中起到至关重要的作用。越来越多的研究表明,细胞自噬参与了多种致病因素导致ALI的发生发展,但失血性休克后ALI的发生是否与细胞自噬有关?PHSML介导的ALI是否与细胞自噬有关?均还不清楚。同时,SGB能否减轻失血性休克后PHSML介导的ALI、以及其机制是否是通过调节细胞自噬来实现的?需要进一步证实。鉴于上述分析,我们假定“SGB通过抑制细胞自噬进而减轻PHSML介导的ALI”。为此,本文从整体动物实验、细胞实验两方面研究细胞自噬在SGB减轻PHSML介导ALI中的作用机制。一方面,应用清醒失血性休克大鼠模型,观察SGB、细胞自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对失血性休克ALI的作用,进一步观察回输PHSML、细胞自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)对SGB减轻失血性休克ALI良好作用的影响。另一方面,建立大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)原代培养技术,观察SGB处理的大鼠PHSML对PMVECs活力与细胞自噬的作用。首先,雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(SG处注射生理盐水,sham组)、休克组(SG处注射生理盐水,40 mm Hg,60 min,shock组)、实施SGB的sham组(sham-SGB组)、实施SGB的shock组(shock-SGB组)。在shock组液体复苏结束后引流PHSML 3 h,sham组在相应时间点引流肠淋巴液30 min,相应淋巴液分别为正常肠淋巴液(NML)、施予SGB的NML(NML-SGB)、失血性休克肠淋巴液(PHSML)、施予SGB的PHSML(PHSML-SGB)。无菌操作取出淋巴液后冻存于-80℃冰箱,用于观察对Shock-SGB动物、PMVECs的作用。然后,雄性Wistar大鼠随机分为Sham组、Sham-SGB组、Shock组、Shock-SGB组、Shock+3-MA组(液体复苏时静脉输入3-MA溶液)、Shock-SGB+RAPA组(液体复苏时腹腔注射RAPA)、ShockSGB+PHSML组(液体复苏时静脉输入PHSML)。在液体复苏结束后3 h或相应时间点留取肺组织,观察肺组织结构,检测肺组织含水量以及细胞自噬标志蛋白LC3 II/I、Beclin-1的表达。研究结果显示,与Sham组相比,Shock组肺组织结构损伤较重,肺组织含水量、LC3 II/I和Beclin 1蛋白表达显著上调,结果表明失血性休克引起了肺组织损伤与细胞自噬;与Shock组相比,Shock-SGB组大鼠肺组织结构较轻,肺泡壁水肿及肺泡充血、出血减轻明显,肺组织含水量、LC3 II/I及Beclin 1蛋白表达均显著降低,结果表明SGB减轻了失血性休克后的肺组织损伤与细胞自噬;3-MA治疗显著减轻了Shock大鼠的肺组织损伤程度,降低了肺组织含水量、LC3Ⅱ及Beclin 1蛋白表达,结果表明抑制细胞自噬可减轻失血性休克后的ALI;RAPA在增加ShockSGB大鼠肺组织LC3 II/I及Beclin 1蛋白表达的同时,增加了肺组织结构损伤的程度,结果表明SGB的有益作用是通过抑制肺组织细胞自噬实现的;静脉回输PHSML后,Shock-SGB+PHSML组较ShockSGB组,大鼠肺泡充血、出血显著加重,肺损伤评分及含水量均上升且自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Beclin 1蛋白均上调,结果表明静脉回输PHSML有增加细胞自噬作用,进而废除SGB对失血性休克后ALI的保护作用,也说明SGB减轻失血性休克肺损伤的作用与PHSML有关。最后,原代培养大鼠PMVECs,应用流式细胞术检测细胞纯度达标后,用后续实验。应用不同浓度的PHSML与大鼠PMVECs共培养不同时间,CCK 8方法检测细胞活力,确定PHSML对大鼠PMVECs的作用时间(9 h)与浓度(8%)。然后,根据处理因素不同,将细胞学实验分为:Control组、NML组、PHSML组、NML-SGB组、PHSMLSGB组,检测细胞活力和LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白表达。结果显示,与Control组相比,PHSML组细胞活力显著下降,LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin 1蛋白显著上升;最为重要的是,与PHSML组相比,PHSML-SGB组细胞活力显著上升,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin 1蛋白显著下降。结果表明,SGB处理减轻了PHSML对大鼠PMVECs的损伤与细胞自噬水平。综上所述,SGB预处理、抑制细胞自噬均减轻失血性休克后的ALI,回输PHSML与激动细胞自噬抑制了SGB的保护性作用,表明SGB减轻ALI的作用是通过降低细胞自噬实现的,且与PHSML回流有关。总之,抑制细胞自噬参与了SGB减轻PHSML介导ALI的机制。