羊栖菜中萜类成分的提取与纯化方法研究

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羊栖菜(Sargassum fusiforme)是一种营养价值高,保健效果好,应用前景广的可食用海藻。由于其多糖含量较高,近年来羊栖菜的相关研究工作主要围绕其多糖类成分展开,并且取得了很多振奋人心的成果;然而羊栖菜中的萜类成分则由于含量较低而往往被人们忽视。研究表明萜类物质因具有显著的抗肿瘤、防治老年痴呆等生物活性,已经获得越来越多的关注。因此,本文针对羊栖菜中含量低且结构相似的萜类成分,采用微波辅助提取技术(MAE)、新型绿色溶剂提取技术以及高速逆流色谱技术(HSCCC)研究了羊栖菜中萜类成分的高效提取和纯化方法,主要研究内容和结果如下:1、研究建立了微波辅助提取羊栖菜中三种萜类物质的方法。对比六种常用提取溶剂,得出水对三种萜类物质的提取率最高。采用单因素实验选取料液比,微波功率,提取时间,提取温度这四个因素的三个水平,正交试验优化得到微波辅助提取的最佳参数:1:30的料液比,800W的微波功率,15min的提取时间,80℃的提取温度。相比超声辅助提取和热回流提取,微波辅助提取提取率更高(从4.38%提升到31.6%),耗时更少(从2h减少到15min)。上述结论表明微波辅助提取能有效地提取羊栖菜中三种萜类物质。2、研究建立了新型绿色天然深共晶溶剂提取羊栖菜中三种萜类物质的方法。采用绿色天然深共晶溶剂,微波辅助提取羊栖菜中的三种萜类物质,得到含25%天然深共晶溶剂的水溶液对三种萜类物质的提取率分别比水高2.83%~36.92%、4.39%~9.51%、13.9%~57.7%。实验表明当天然深共晶溶剂含水量为50%或75%时对三种萜类物质的提取率较大。同时它能加快提取速率,节省约2/3时问。天然深共晶溶剂提取三种萜类物质的回收率在69%~75.5%之问,表明它能有效提取羊栖菜中三种萜类物质,且更绿色环保。3、研究建立了羊栖菜中三种萜类物质的逆流色谱纯化方法。采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1:2:1:2,v/v)溶剂体系,成功从300mg羊栖菜粗提物中一次制备得到33.87mg化合物1、2的混合物以及12.35mg化合物3,其中化合物3的纯度为95.5%。采用乙腈:水(20:80,v/v)流动相等度洗脱,成功用制备型液相色谱从15mg化合物1、2的混合物中分离得到4.24mg化合物1和3.86mg化合物2,纯度分别为96.2%和95.8%。化合物1,2,3鉴定为Loliolide, Isololiolide,(3R)-4-[(2R,4S)-4-acetoxy-2-hydroxy-2,6,6-trimethylcyclohexylidene]-3-buten-2-one。研究结果表明逆流色谱非常适用于羊栖菜中萜类物质的分离与浓缩,制备型液相色谱适用于分离萜类同分异构体。
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