微生物转化法生产人参皂苷C-K工艺条件的研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:dd1246
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本文主要研究的内容是以人参二醇类皂苷PPD为底物,利用微生物酶法转化生产人参稀有皂苷C-K,利用高压硅胶柱分离法提取人参皂苷C-K,并用高效液相色谱对其纯度进行确认。为了得到具有较高转化能力的皂苷糖苷酶的菌株,选取了4种菌株,比较产人参皂苷C-K酶的能力。实验发现sp.848产的生成人参皂苷C-K酶的能力最强。该菌株在28℃至30℃条件下发酵7天,产酶最好。真菌sp.848所产酶,经过DEAE-Cellulose离子交换层析柱分离后,再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,并进行酶的性质的研究。在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中其分子量约为74kDa;不同于前届研究生王亮从sp.48产酶的分子量77kDa。该酶最佳pn5.0,酶最佳反应温度是45℃。其纯酶对于人参二醇类皂苷Rb1、Rb2、Rc等单体降解能力强,说明该酶为多种糖基的水解酶,是属于人参皂苷糖苷酶Ⅰ型酶;该酶对于人参皂苷Rb1、Rb2、Rc可较大程度转化为人参皂苷C-K,对于人参皂苷Rd转化成C-K较弱。依据最适的酶反应条件扩大酶反应。酶反应产物利用D-296树脂脱色柱除去杂质,除去杂质占总重的4.74%。再经石油醚脱酯,脱酯共除去杂质占总重的7.46%。常压硅胶柱洗脱速度慢,高压硅胶柱洗脱快,利用高压硅胶柱层析法进行分离提纯,以V(氯仿):V(甲醇)=9.5:0.5的混合液为洗脱剂进行洗脱,从335g粗品中得到138g纯度为80%-85%的人参皂苷C-K,其重量收率为41.2%。硅胶柱分离得到的人参皂苷C-K用重结晶方法精制,得率90%,高效液相色谱检测其纯度为97%。
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