【摘 要】
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[目的] 淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因NYD-Tr和NYD-Ch的体外表达对人类绒癌细胞和肝癌细胞的影响。 [材料和方法] 本研究在本实验室已克隆的淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关NY
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[目的] 淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因NYD-Tr和NYD-Ch的体外表达对人类绒癌细胞和肝癌细胞的影响。 [材料和方法] 本研究在本实验室已克隆的淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关NYD-Tr和NYD-Ch基因全长序列的基础上,设计引物,将开读框序列克隆入以绿色荧光蛋白为报告基因的真核表达载体pEGFP-C3。空载质粒和重组质粒用转染试剂FuGene 6转入JAR细胞株(人绒毛膜癌细月包株),用转染试剂Effectene Reagent转入HepG2细胞株(人肝细胞癌细胞株)。经荧光倒置显微镜观察到基因表达后,在激光共聚焦显微镜下观察荧光的表达和细胞的形态。经G418筛选得到的阳性细胞通过MTT、电镜和流式细胞仪观察细胞的形态和生长情况。 [结果] 测序和酶切实验表明,得到的淡色库蚊NYD-Tr和NYD-Ch全长序列与GenBank公布的一致,并且和EGFP基因同框表达。质粒成功转染入两株细胞并表达。FuGene 6转染JAR细胞的效率要高于Effectene Reagent转染HepG2细胞。在共聚焦显微镜下拍摄到,和仅表达EGFP的细胞相比,NYD-Tr和NYD-Ch与EGFP的共表达使细胞的形态受到影响,细胞出现皱缩和崩解现象。MTT结果显示,转染pEGFP-C3/NYD-Tr和pEGFP-C3/NYD-Ch的JAR细胞与转染空载质粒相比,3天平均生长速度分别减慢39.51%和45.88%;转染pEGFP-C3/NYD-Tr和pEGFP-C3/NYD-Ch的HepG2细胞,生长速度与转染空载质粒的相比,3天平均生长速度分别减慢14.39%和63.13%。电镜结果提示转染pEGFP-C3/NYD-Tr和pEGFP-C3/NYD-Ch的JAR细胞受到了较为严重的损伤。 [结论] 淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因NYD-Tr和NYD-Ch对体外培养绒癌细胞JAR和肝癌细胞HepG2有一定抑制和损伤作用,值 南京医科大学硕士学位论文得进一步研究。
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