论文部分内容阅读
【背景】 大量研究显示血脂异常与心脑血管疾病关系十分密切。但至今仍有若干问题未能得到合理的解释。其主要原因是认识上未把握血清脂蛋白完整颗粒结构与功能的紧密联系,忽视了它们动态平衡的重要性。临床检测上始终未能有效解决同步分离和统一参比的难题,难以表达它们的动态平衡状态。 我们创建的血清脂蛋白谱(SLPG)检测方法能将血清脂蛋白同步分离出9~11条带,包括非酯化脂肪酸清蛋白(AL-NEFA)、5种α脂蛋白亚组分(αLp1~5)、β脂蛋白(βLp)、中间β脂蛋白(intβLp)、2种前β脂蛋白亚组分(pre β Lp1-2)和乳糜微粒(CM)。该法采用统一参比的量化分析手段,全面而具体地表达了血清脂蛋白动态平衡(SLDB)状态。其表达性能在国内外同类研究中是独一无二的。以往研究已充分表明了SLPG具有明显的临床意义和应用前景。 【目的】 1、考察SLPG的科学性,印证SLPG各电泳峰的内涵,对SLPG检测方法的进行基础验证。 2、观测各种血清脂蛋白及其亚组分的理化特性,包括颗粒形态、大小及其载脂蛋白(apo)与胆固醇(Chol)的构成。 3、观察非高脂性血清中各种脂蛋白及其亚组分颗粒大小的分布。 4、考察小而密低密度脂蛋白(sLDL)的真实性与可靠性。 【材料和方法】 1、混合血清来自134份成人血样。常规血脂水平包括甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),均在推荐的合适或边缘范围。 2、应用DGPAGE法分离血清脂蛋白,将各电泳区带的脂蛋白及其亚组分分别洗脱和收集。 3、采用负染色透射电子显微技术观察血清脂蛋白及其亚组分的形态。通过软件Photoshop 7.0和Image Pro 4.5完成电镜图象中脂蛋白颗粒的计数和测量。第一军医大学博士学位论文4、应用免疫比浊法和酶法分别测定洗脱后收集的脂蛋白溶液中aP。与Chol的含量,并计算出它们的相对重量比。 【结果】1、电子显微观测非高脂性血清脂蛋白颗粒的形态主要呈球状。2、各种脂蛋白及其亚组分球状颗粒大小按序演变。球状颗粒的直径在AL一NEFA最小(3.15士o.4onm);a Lp亚组分为(5.55士。,slnm)一(13.32士1.02nm);pLP为25.75土4.4onm;intpLP为34.53士7.74nm;除外pre p Lp亚组分(39.82士9.ognm和39.26士12.57nrn),其它脂蛋白及其亚组分之间均有显著性差异(P<0.05)。球状颗粒大小的频数分布在AL一EFA和。LP各亚组分中呈单峰状,其它均呈双峰状。pLP球状颗粒中直径<25.5nm的颗粒占57.“%。3、各种脂蛋白及其亚组分中叩o/chol重量比按序演变。(1)即0 Al/Chol重量比在AL扳EFA中最高(4.80士0.54),在a Lp各亚组分随电泳迁移快慢而逐渐降低,均值范围为4.21一1 .45,除。Lp3和“LP;外,其它各亚组分两两比较均有显著性差异(P<o.05)。(2)叩oB/ehol重量比在DLP、int p Lp和prep印1中随电泳迁移快慢的顺序逐渐增高,依次为0.85士0.22,0.96士0.30和1.08士0.33,差异无显著性(P>o.os)。pre p Lp:中的即oB/ehol重量比(2.40士0.97)显著高于其它组分(P<o.05)。【结论】1、血清脂蛋白具有明显的颗粒性,是一种非细胞形态的功能单位。血清脂蛋白系统可能是一个独立的生理功能系统,正常状态下处于协调的动态平衡之中。2、sLPG检测方法能同步表达常法不能表达的整体血清脂蛋白及其亚组分的相对量的关系。3、各种血清脂蛋白及其亚组分的颗粒大小和apo/c hol重量比按其电泳迁移快慢的顺序规律性地演变。结果与传统对脂蛋白及其代谢的认识一致,验证了SLPG检测方法的科学性,提供了可靠的实验依据。4、AL一EFA区带中含有脂质或脂蛋白成分,应纳入血脂分析的内容。5、。LPI可能是新生的HDL(n-HDL),SLPG可能为临床检测n-HDL提供突破。第一军医大学博士学位论文6、。LP各亚组分的颗粒特性按序演变,可能与它们逆转运Chol的不同状态有关。7、非高脂性血清中普遍存在sLDL,可能有潜在的致AS危险,或者只是LDL正常代谢的表现。8、int pLP区带可能包含脂蛋白(a)「LP(a)}成分,SLPG可为其临床检测提供新途径。9、pre pLP亚组分的演变过程可能伴随活跃的胆固醇酷(CE)转移。