贝类养殖业是我国海洋经济的支柱性产业，由于近年来养殖贝类的大规模死亡现象时有发生，病害日渐严重，已成为贝类养殖业发展的瓶颈问题。贝类的免疫防御系统在防御疾病中扮演着极重要的角色。因此，研究贝类免疫学，以更好地了解和解决贝类养殖中的病害问题已经非常迫切。本文就贝类的血细胞分类和细胞免疫功能，贝类血清凝集素的凝集特性，重金属对贝类免疫活性的影响和免疫调节剂对扇贝免疫活性的调节作用，以及三倍体扇贝免疫功能进行了系统全面的研究，以期更好的了解贝类的防御机制，并力图从免疫学角度提高贝类的防御能力，服务于生产。 由于血细胞在抵御外来病原中起着重要的作用，因此对血细胞的形态、结构和功能有一个细致的了解对更好的研究免疫防御机制是非常必要的。用流式细胞仪和细胞化学染色方法对毛蚶和栉孔扇贝的血细胞进行了分类研究，并在光学显微镜下对血细胞进行观察。毛蚶的血细胞主要有四种组成，其中以红细胞为主，直径为18.4+0.97μm；透明细胞为5.63±1.49μm，核染色深，瑞氏染色胞质内光镜下未见颗粒；颗粒细胞胞质中含有着色颗粒，瑞氏染液染色后一种为桔红色，8±1.06μm，另一种为兰色，6.3±1.25μm；另外还有极少量血细胞几乎没有细胞质，细胞大小为5.17±1.69μm。栉孔扇贝的血细胞主要有两种组成，分别为透明细胞和颗粒细胞，其中透明细胞瑞氏吉姆萨染液染色细胞质内几乎没有光学显微镜下能够观察到的颗粒，核质比大，直径为7.3±0.97μm；颗粒细胞细胞质中有颗粒，核质比较小，直径为10.24±0.64μm。 对毛蚶和栉孔扇贝血细胞的体外吞噬作用进行研究，结果表明，毛蚶的血细胞能够对白色念珠菌进行体外吞噬，并首次发现在贝类中除了颗粒细胞和透明细胞外，红细胞也能够进行吞噬作用，并在这3种细胞中起主导作用。30℃可以作为毛蚶血细胞体外吞噬作用的最佳反应条件，吞噬百分率可达到62.11％。利用鳗弧菌Vibrio anguillirum对毛蚶进行免疫刺激后，毛蚶血细胞的吞噬能力与对照组相比明显增加。扇贝血细胞也可以在体外吞噬白色念珠菌，光学显微镜下可中国海洋大学博士学位论文摘要以观察到有些白色念珠菌粘附在血细胞膜外部，有些血细胞膜在白色念珠菌粘附处已经形成凹陷，有些血细胞正在伸出伪足正在进行吞噬白色念珠菌。本实验中发现伪足在扇贝的吞噬作用中起着重要的作用。20℃可以作为栉孔扇贝血细胞体外吞噬作用的适宜反应条件，温度对比实验中吞噬百分率最高达到38.05%。 利用改进的NBT法检测栉孔扇贝血细胞活性氧的产生，NBT阴性血细胞呈浅粉红色，无暗蓝色沉淀颗粒。NBT阳性血细胞有光学显微镜可观察到的暗蓝色沉淀物Formazan。实验发现，在自然状态下，栉孔扇贝有能够检测到的活性氧产生，本实验检测的栉孔扇贝的NBT阳性细胞占血细胞总数的20一35%。 分别对海湾扇贝、虾夷扇贝、栉孔扇贝的三种血细胞胞内酶:碱性磷酸酶(ALP)、过氧化物酶(P OD)、酚氧化酶(PO)进行了免疫细胞化学定位，并对血细胞酶反应阳性率作了统计。结果表明:三种扇贝血细胞ALP阳性率相差不大，海湾扇贝为46.6%，虾夷扇贝为42.4%，栉孔扇贝为36.8%;三种扇贝血细胞POD阳性率相差较大，栉孔扇贝阳性率高达502%，海湾扇贝为44.2%，虾夷扇贝仅为17.2%;三种扇贝血细胞PO孵育反应后，由于海湾扇贝、虾夷扇贝PO反应活性很低，瑞氏染液复染后，无法区分阴性、阳性细胞。实验中对栉孔扇贝PO阳性率进行了统计，栉孔扇贝血细胞PO阳性率为39.3%。 凝集素作为贝类体内参与体液免疫的非特异性免疫因子，在免疫防御活动中发挥着对异体成分进行识别、调理和促吞噬等重要作用。以毛蜡为实验材料，对其血清中的外源凝集素进行研究。毛蜡血清外源凝集素对人的A、B、O血型血细胞、鸡和小鼠的血细胞均有凝集作用，凝集效价分别为256、256、8、16、64;同时它还能对白色念珠菌、啤酒酵母、溶藻胶弧菌等微生物细胞具有凝集作用。毛蜡血清外源凝集素具有一定的pH稳定性和热稳定性。在选用的12种单糖和寡糖中，L一鼠李糖、L一树胶醛糖、麦芽糖、D一半乳糖、蔗糖对毛蜡血清的凝集活性有明显的抑制作用。用弧菌对毛蜡进行免疫刺激，其血清对血细胞的凝集效价明显增加。 溶酶体在贝类的免疫防御中起着重要的作用，在亚细胞水平，溶酶体通常被作为污染物等毒性物质作用的目标，溶酶体的病理性变化也是检测环境胁迫对海洋生物影响的指标。本文以栉孔扇贝为材料，以重金属Cu2+胁迫栉孔扇贝，通过NRR法来检测重金属离子对扇贝血细胞溶酶体膜的损伤，同时结合血细胞活中国海洋大学博士学位论文摘要性氧和血清过氧化氢酶活性的变化趋势，从细胞器的损伤、超氧化物的增加和抗氧化作用的变化关系来研究Cu2+对栉孔扇贝免疫系统的作用。在光学显微镜下可观察到栉孔扇贝血细胞在受到中性红作用后，达到一定量和时间后，血细胞内有小的红色球状液滴，随着作用时间的延长，液滴逐渐膨大，血细胞也由不规则形状而逐渐变圆，膨大，最后可观察到整个血细胞的细胞质成为粉红色。结果表明，Cu2+的胁迫会导致溶酶体膜完整性的降低?