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丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal Ⅲ型（serine protease inhibitor, Kazal type3, SPINK3）是一种胰蛋白酶抑制剂，在胰腺癌、大肠癌，乳腺癌、前列腺癌、肝癌等多种肿瘤中高表达，但其对肝癌细胞株的作用研究尚未见报道。为此，本文构建了spink3基因的表达载体（pEGFP-N1-spink3），干涉载体（pGenesil-1.0-spink3(123)和pGenesil-1.0-spink3(143)）和检验载体（pGenesil-1.0-spink3(123)-spink3、spink3(143)-spink3和-HK-spink3）。将各检验载体进行尾静脉液压转基因至小鼠肝脏，用荧光显微技术观察与SPINK3融合表达的增强型绿色荧光蛋白（enhanced greenfluorescent protein, EGFP）的阳性细胞率，筛选出最佳干涉载体。采用脂质体介导法将4种质粒（表达载体pEGFP-N1-spink3及其对照pEGFP-N1，最佳干涉载体pGenesil-1.0-spink3(123)及其对照pGenesil-1.0-HK）转染肝癌细胞株BEL-7402，并用G418选择性培养基筛选出稳定转染细胞株。对正常BEL-7402细胞株和上述筛选出来的四种稳定细胞株用下列方法进行检测：通过HE染色观察细胞形态结构；荧光显微镜下观察细胞形态以及EGFP分布；通过计数法和普通MTT法绘制细胞的生长曲线；通过PCNA细胞免疫化学检测细胞中PCNA的表达变化；通过Hoechst33258染色检测细胞凋亡；通过甲基纤维素半固体培养基检测集落形成率；通过药物MTT法检测细胞的耐药性。结果表明： SPINK3-EGFP融合蛋白均匀分布在细胞质中，细胞核无荧光，并且在细胞核外侧核膜周围表达量较高，为典型的分泌性表达模式；spink3能抑制肝癌细胞株BEL-7402增殖，但不引起细胞凋亡；spink3能够降低肝癌细胞株BEL-7402恶性程度，但对其耐药性无明显影响。