胫骨软骨发育不良（Tibial Dyschondroplasia,TD）对家禽的影响是全球养禽业都会面临的一个问题,目前还没有检测该病的成熟技术。课题组前期在研究TD时通过基因芯片技术,发现在TD早期时细胞外脂肪酸蛋白（Ex-FABP）基因有差异性表达,因此制备Ex-FABP单克隆抗体及建立Ex-FABP检测方法为早期诊断TD奠定基础。将重组蛋白Ex-FABP纯化,作为免疫原,免疫6周龄SPF级BALB/C小鼠,每两周一次,三次免疫后用建立的间接ELISA测效价,选取效价最高的进行加强免疫,准备SP2/0骨髓瘤细胞融合。取重组蛋白EX-FABP和GSTA3包被,通过间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,挑选数值较高的阳性孔进行亚克隆,获得5株杂交瘤细胞株,命名为5B7、4E4、5D12、1H6和4B2,腹水效价高达1:10¹¹,亚类鉴定均为IgG₁。将5株单克隆抗体包被酶标板,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体为酶标抗体,用于建双抗夹心ELISA方法。经过试验,确定4E4作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的5D12为酶标抗体;包被单抗4E4的稀释倍数为1:2 000,4℃过夜;用10%马血清的白板稀释液,37℃作用2 h;血清样品上样量50μL,37℃30 min;酶标抗体5D12稀释倍数为1:2 000,37℃30 min;底物显色液反应时间为15 min。用该方法检测1688份临床样品,初步显示出双抗夹心ELISA方法的良好效果。将实验室TD动物模型注射重组蛋白Ex-FABP动物试验血清样品进行Western Blot试验,设置SPF血清样品作为对照。根据成像结果与建好的双抗夹心ELISA结果对比分析,Western Blot检测结果显示血清中Ex-FABP的条带含量与其双抗夹心ELISA方法检出的数值符合。表明双抗夹心ELISA方法可用于实验室检测血清中的Ex-FABP。课题组前期研究发现TD早期Ex-FABP基因有显著的上调表达,为了更好地研究Ex-FABP在TD发生过程中的作用,制备重组蛋白Ex-FABP的单克隆抗体并建立了双抗夹心ELISA方法,用来快速、特异、灵敏的检测Ex-FABP,为后期更好的研究Ex-FABP奠定基础。