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燃料乙醇是目前发展前景良好可再生清洁能源,利用木质纤维素原料生产燃料乙醇是解决当前能源危机和环境污染的有效手段之一。本论文针对木质纤维素原料水解产物中的第二大糖类木糖转化为乙醇的效率较低,以及木质纤维素原料生产燃料乙醇工艺中菌株耐温性较差的问题,选育一株在高温下利用木糖产乙醇能力有所提高的酵母菌株,以期提高以木质纤维素原料进行乙醇发酵的转化效率。论文首先对两株利用木糖发酵产乙醇的酵母菌株Spathaspora passalidarum NRRL Y-27907和Pichia stipitis NRRL Y-7124进行了对比,综合了胁迫耐受性(乙醇、温度、渗透压),糖发酵能力(葡萄糖、木糖、葡萄糖和木糖混合糖)和高温发酵能力对比实验的结果,可知NRRL Y-27907对高浓度乙醇、高温、高渗条件的耐受性比NRRL Y-7124更强。NRRL Y-27907葡萄糖发酵能力略低于NRRL Y-7124,但木糖发酵能力优于NRRL Y-7124。同时NRRLY-27907的葡萄糖阻遏效应较弱,葡萄糖和木糖混糖发酵能力明显优于NRRL Y-7124。在30℃到39℃C下,NRRL Y-27907的木糖乙醇发酵能力皆优于NRRL Y-7124,具有更好的高温发酵潜力。所以本实验选择Spathaspora passalidarum NRRL Y-27907 (U)作为出发菌株进行下一步的改造。对出发菌株U进行紫外诱变,高温传代富集,分离得到200株耐高温菌株。进而通过试管发酵初筛和全自动生长曲线分析仪初筛,摇瓶发酵复筛,筛选得到了一株高温下木糖乙醇发酵能力相对于出发菌株有所提高的突变株U-30。U-30在37℃下的乙醇产量为13.62g/L,相对于出发菌株U提高了13.03%。采用单亲株(U-30)热灭活,以木糖唯一碳源平板作为融合子初筛平板,对U-30和耐高温酿酒酵母菌株F3进行了原生质体融合最终筛选获得融合子UF44,其高温条件下木糖乙醇发酵能力较其亲本U-30显著提高,在37℃下的乙醇产量为16.45g/L,比U-30提高了20.78%,且遗传性状稳定。