黄颡鱼基础免疫的研究

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本研究采用了MBP亲和层析柱、TG亲和层析柱和免疫亲和层析柱三种蛋白纯化方法纯化黄颡鱼血清IgM。寻求最佳的纯化鱼类血清IgM的方法。对纯化的黄颡鱼血清IgM的纯度和分子量进行了分析,制备出兔抗黄颡鱼IgM的抗血清。本研究还对黄颡鱼血细胞的显微和亚显微结构进行了观察,此外,还对不同年龄的正常黄颡鱼的胸腺的显微结构进行了观察。这些工作为黄颡鱼的基础免疫学研究积累了资料,并为深入研究其免疫机理和免疫学的应用提供基础。实验结果如下: 免疫亲和层析法是有效的纯化鱼类血清IgM的方法,如果实验鱼免疫得当,可以获得大量纯化产物,只是这种方法需要一个较长的免疫实验鱼的过程。MBP亲和层析柱是最简洁的纯化黄颡鱼血清IgM的方法,纯化产物多,纯度高。TG亲和层析柱也能够获得纯化的黄颡鱼血清IgM,但这种方法的得到的纯化产物不多。纯化出黄颡鱼血清IgM后,经SDS-PAGE电泳测得黄颡鱼血清IgM的H链和L链的分子量分别为72.4kD和29.9kD。用通过免疫亲和层析法纯化的黄颡鱼血清IgM作为抗原免疫大白兔,制备了兔抗黄颡鱼IgM的抗血清。采用夹心ELISA法检测了兔抗黄颡鱼IgM的抗血清的效价。通过Bradford法,即用考马斯亮蓝G-250染色,以BSA系列稀释液作蛋白标准,检测了正常黄颡鱼血清中总蛋白含量;以正常黄颡鱼血清IgM系列稀释液作蛋白标准,通过夹心ELISA法检测正常黄颡鱼血清中IgM的含量。正常黄颡鱼血清中IgM和血清总蛋白含量分别为1.16mg/ml和17.57mg/ml,经过计算,正常黄颡鱼血清中IgM占血清总蛋白的比例为6.60%。 在黄颡鱼外周血涂片中,可见到红细胞、血栓细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞,在黄颡鱼外周血超薄切片上可分辨出两类特殊的颗粒白细胞。本文对上述各种血细胞在光镜和电镜观察下的形态和细微结构进行了描述。 黄颡鱼胸腺位于鳃腔背上角,紧贴在鳃腔上皮层之下,上耳咽匙肌之上。其组织结构可明显分为外区、中区和内区,外区主要由网状上皮细胞、柱状上皮细胞、粘液细胞组成;中区以大量深染致密的淋巴细胞为特征。在中区和内区均可见由2个或2个以上的内皮细胞围绕一个空腔或肥大细胞所构成的哈塞尔囊结构。黄颡鱼胸腺被膜上可以观察到由胸腺被膜凹陷形成的小孔,小孔的功能可能与抗原的摄取有关。Ⅰ龄黄颡鱼胸腺被结缔小梁支撑,Ⅱ龄鱼开始出现明显的脂肪退化,Ⅲ龄黄颡鱼胸腺为一种特殊的退化结构。
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