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第一部分miR-153在不同组织中表达和质粒的转染与细胞模型的鉴定目的研究miR-153在人肝癌细胞系、正常人肝细胞、人肝癌组织及相应的癌旁组织中的表达情况；构建miR-153高表达和低表达的细胞模型,以及模型鉴定。方法1.采用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)实验,检测miR-153在正常人肝细胞、人肝癌细胞系Bel-7402、MHCC97H、MHCC97L、QGY-7703、Huh7、 HCCC-9810、Hep3B、HepG2、人肝癌组织及相应的癌旁组织(14例随机临床病例)中的表达。2.通过使用脂质体瞬时转染的方法把miR-153模拟寡核苷酸(miR-153mimic; miR-153)转染到细胞系中以提高HepG2和Huh7两株肝癌细胞系中miR-153的表达量,同法将miR-153抑制物;miR-153inhibitor; miR-153-in)转染到细胞系中降低HepG2和Huh7两株肝癌细胞系中miR-153的表达量,来构建miR-153高表达和低表达的细胞模型。3.模型鉴定使用Real-time PCR方法。结果1.与正常人肝细胞相比,miR-153在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达明显下降(P＜0.05)。2.14例临床病例显示肝癌组织中miR-153的表达量较其相应的癌旁组织明显降低(P＜0.05)。3.转染miR-153到HepG2和Huh7两株肝癌细胞系中后,其miR-153的表达量为HepG2和Huh7母细胞的150倍以上。转染miR-153-in到HepG2和Huh7两株肝癌细胞系中后,其miR-153的表达量为HepG2和Huh7母细胞的0.2以下。结论MiR-153在肝癌细胞和肝癌组织中表达量明显降低。通过转染,高表达miR-153和低表达miR-153的细胞模型构建成功。第二部分miR-153对肝癌细胞转移侵袭能力的影响目的应用高表达miR-153和低表达miR-153的细胞模型,研究miR-153对肝癌细胞转移侵袭能力的影响。方法利用质粒转染miR-153建立的高表达miR-153细胞模型组,质粒转染miR-153-in建立的低表达miR-153的细胞模型组,以及质粒转染阴性对照序列建立的阴性对照组。通过免疫蛋白印迹实验,检测转移相关信号蛋白E-cadherin、 N-cadhein、vimentin、a-catenin等在不同细胞组的表达情况,分析miR-153在肿瘤细胞中的表达情况与肝癌细胞的上皮-间质转变(EMT)之间的联系；通过Transwell小室侵袭实验、三维培养实验、细胞划痕损伤愈合实验,检测miR-153高表达和低表达对肝癌细胞转移侵袭能力的影响。结果1.miR-153低表达的HepG2和Huh7细胞模型组中E-cadherin和a-catenin的蛋白表达量较阴性对照组显著降低(P＜0.05)；而N-cadherin和Vimentin的蛋白表达量则显著增高(P＜0.05)。miR-153高表达的HepG2和Huh7细胞模型组中E-cadherin和a-catenin的蛋白表达量较阴性对照组显著升高(P＜0.05)；而N-cadherin和Vimentin蛋白表达量显著降低(P＜0.05)。2.低表达miR-153细胞模型中,细胞划痕实验显示肝癌细胞的体外迁移能力增强；Transwell小室侵袭实验显示穿过人工重建基底膜的细胞数比阴性对照组高2-5倍；三维培养试验显示其形成的克隆的伪足更为细长、致密,表型恶性度较高。高表达miR-153细胞模型中,细胞划痕实验显示肝癌细胞的体外迁移能力减弱；Transwell小室侵袭实验显示穿过人工重建基底膜的细胞数为阴性对照组的约1/3；三维培养试验显示其形成的的克隆的伪足更为短细、稀松,表型恶性度较低。结论低表达miR-153的肝癌细胞模型组下调了上皮细胞分子标记蛋白a-catenin及E-cadherin,上调了间质细胞分子标记蛋白Vimentin及N-cadherin,促进了细胞上皮-间质转变；而高表达miR-153的肝癌细胞模型抑制了细胞上皮-间质转变。表明了miR-153的表达对肝癌细胞的转移侵袭能力有及其重要的影响,抑制miR-153的表达可以通过促进细胞上皮-间质转变,来增强肝癌细胞的转移侵袭能力。第三部分miR-153通过靶向结合SNAI1抑制其表达翻译目的探讨miR-153调控细胞转移侵袭能力潜在的分子机制。方法利用TargetScan、Pictar和miRANDA分析软件来分析miR-153可能的基因结合位点,发现miR-153的潜在靶蛋白SNAI1;通过免疫蛋白印迹实验、分子克隆技术、荧光素酶报告基因活性实验,检测miR-153与SNAI1的结合位点以及高表达miR-153和低表达miR-153的细胞模型中,以及结合位点突变模型中miR-153对SNAI1表达的影响；通过分析10例临床肝癌组织标本,对miR-153与SNAI1的表达进行相关性分析。结果1.通过软件分析发现miR-153可能的靶蛋白是SNAI1;2.免疫蛋白印迹实验结果显示：miR-153高表达细胞模型组SNAI1的蛋白表达量下降,miR-153低表达细胞模型组SNAI1的蛋白表达量则上调；3.使用分子克隆技术将SNAI1的3’非翻译区(3’UTR)标记绿色荧光蛋白基因(GFP)后行荧光素酶报告基因活性实验显示：miR-153高表达细胞模型组比阴性对照组的GFP蛋白荧光信号明显降低(P＜0.05)；4.利用点突变技术使SNAI1-3’UTR序列结合位点突变,利用萤火虫荧光素酶基因(pGL3)标记突变基因,得到pGL3-SNAI1-3’UTR-mut,荧光素酶报告基因活性实验显示：miR-153高表达细胞模型组的pGL3的荧光信号较阴性对照组降低,突变组与阴性对照组的荧光信号基本一致,miR-153低表达细胞模型组的pGL3的荧光信号较阴性对照组增强；5.通过对临床样品的检测,对miR-153与SNAI1的表达进行相关性分析结果提示呈负相关(R=-0.744,(P＜0.01)。结论miR-153通过靶向结合于SNAI1的3’UTR区域下调SNAI1的表达。临床样本分析两者的表达呈负相关。高表达miR-153的肝癌组织可能通过抑制SNAI1蛋白的表达来增强肝癌的转移侵袭能力。SNAI1作为miR-153的靶蛋白在抑制肝癌转移侵袭过程中可能发挥重要的作用。