梨幼果熊果苷提取纯化及抗氧化活性评价研究

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熊果苷具有美白、抗氧化、镇咳祛痰等多种功效,在梨幼果时期含量极其丰富,但疏果时大量梨幼果被直接丢弃,造成了熊果苷资源的浪费。本试验以‘黄梨1号’幼果为试验材料,采用超声波辅助法和反复冻融法对梨幼果熊果苷提取工艺进行优化,比较5种大孔吸附树脂对熊果苷的纯化效果,筛选适宜提取和纯化工艺,评价熊果苷粗提物及纯化物抗氧化能力,以期为梨幼果熊果苷资源进一步开发利用提供依据。本文的主要研究结果如下:1.利用响应面分析法对超声波辅助提取法和反复冻融法提取梨幼果熊果苷的工艺参数进行优化,并与传统提取方法进行比较。研究乙醇体积分数、料液比、超声时间和超声功率四个因素对熊果苷提取量的影响,并利用Box-Behnken试验设计对熊果苷的提取参数优化,乙醇体积分数70%,料液比1:12,超声功率576 W,超声时间20 min,提取量可达5309.27±15.87μg·g-1,与预测值的相对误差为1.23%。在单因素试验基础上,优化反复冻融法的提取工艺参数,结合前期单因素试验,最佳工艺条件为:乙醇体积分数60%,料液比1:12,冻结时间1 h,解冻温度80℃,冻融次数2次,熊果苷提取量达5156.94±32.97μg·g-1,相对误差为2.70%。传统提取法的熊果苷提取量仅为1935.25±44.13μg·g-1。超声波辅助提取熊果苷的提取量显著高于反复冻融法和传统提取法的提取量。采用扫描电镜观察不同提取方法对梨幼果细胞形态的变化,发现超声波处理后梨幼果细胞破碎程度大于反复冻融法和传统提取法对细胞的破碎程度。2.比较X-8、AB-8、S8、NKA-9和NKA-2五种吸附树脂的吸附与解吸性能,NKA-9树脂的吸附量与解吸率均为最高,分别为3189.89μg·g-1和43.61%。因此,NKA-9吸附树脂是纯化梨幼果熊果苷的最佳树脂。通过静态和动态吸附解吸试验得到NKA-9树脂纯化梨幼果熊果苷的最佳条件为:将80 m L 400μg·m L-1的熊果苷粗提液调至p H值为6.0,设定上样流速为1.5 m L·min-1,充分吸附,用400 m L p H为7.0的80%乙醇溶液进行动态洗脱,洗脱流速为1.5 m L·min-1。经过纯化,梨幼果熊果苷的纯度提高了33.8倍。3.以1.2 mg·m L-1熊果苷标品为对照,‘黄梨1号’幼果熊果苷粗提液和纯化液的DPPH自由基清除率分别为46.24%和73.33%;FRAP还原力分别为77.58%和90.43%;ABTS+清除率分别为84.87%和89.62%。‘黄梨1号’幼果熊果苷纯化液的DPPH、FRAP和ABTS+的抗氧化能力均显著高于熊果苷粗提液,但显著低于熊果苷标品。
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