目的:观察以防龋基因疫苗pVAX1-Spap/P、pVAX1-GbpA/GBD、pVAX1-Spap/P-GbpA/GBD搭载温敏型生物降解水凝胶PLGA-PEG-PLGA经股四头肌注射、口服、颌下腺周注射以及鼻腔粘膜滴注四种不同途径免疫SD大鼠，观察诱导特异性抗体产生的动态变化、模型动物的防龋效果，重组质粒在免疫部位的原位表达情况以及免疫动物的一般安全性检查，并探索水凝胶作为缓释载体条件下的最佳免疫途径。方法：本实验包括两部分：实验一：利用质粒纯化试剂盒大量抽提重组质粒pVAX1-Spap/P、pVAX1-GbpA/GBD、pVAX1-Spap/P-GbpA/GBD以及空载体质粒pVAX1，采用双酶切鉴定正确后，抽提并贮存以备免疫动物使用。实验二：以温敏型生物降解水凝胶PLGA-PEG-PLGA作为载体的重组质粒pVAX1-Spap/P、 pVAX1-GbpA/GBD、 pVAX1-Spap/P-GbpA/GBD以及空载体质粒pVAX1免疫SD大鼠。鼠龄为21d的雄性SD大鼠90只，分为四个大组，每大组随机分为四个小组，每组6只。A大组：24只SD大鼠，随机分为4组，每组6只。A1组：pVAX1-SpaP/P股四头肌注射组；A2组：pVAX1-SpaP/P颌下腺区皮下注射组；A3组：pVAX1-SpaP/P鼻腔黏膜滴注组；A4组：pVAX1-SpaP/P口服组。B大组：24只SD大鼠，随机分为4组，每组6只。B1组：pVAX1-GbpA/GBD股四头肌注射组；B2组：pVAX1-GbpA/GBD颌下腺区皮下注射组；B3组：pVAX1-GbpA/GBD鼻腔黏膜滴注组；B4组：pVAX1-GbpA/GBD口服组。C大组：24只SD大鼠，随机分为4组，每组6只。C1组：pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD股四头肌注射组；C2组：pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD颌下腺区皮下注射组；C3组：pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD鼻腔黏膜滴注组；C4组：pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD口服组。D大组(对照组)：18只SD大鼠，随机分为3组，每组6只。D1组：空载质粒pVAX1股四头肌注射组；D2组：空载体质粒pVAX1口服组；D3组：生理盐水股四头肌注射组。将100μg重组质粒与0.4ml20%水凝胶PLGA-PEG-PLGA混合制备疫苗；建立龋齿模型；免疫剂量:每次免疫剂量为100μg/只，共免疫3次，鼠龄第28d开始首次免疫，每周一次，相同剂量连续免疫三周；收集样本：分别于免疫前1天和免疫后第1-10周收集血液与唾液样本；处死动物后，称重，对心，肝，脾，肺，肾等脏器进行病理检查；取SD大鼠上下颌骨，根据Keyes经典评分方法进行龋损评估；采用酶联免疫吸附实验（间接ELISA法）检测血清中特异性IgG和唾液中S-IgA抗体水平。各组取1只SD大鼠在第2次免疫后处死，采用免疫组织化学SP法观察动物免疫局部组织内目的蛋白表达的情况。结果：①经鉴定pVAX1-Spap/P、pVAX1-GbpA/GBD、pVAX1-Spap/P-GbpA/GBD及空载体质粒pVAX1符合实验要求。②在免疫动物的股四头肌、小肠粘膜、鼻腔粘膜以及颌下腺组织中可见目的蛋白的表达。③免疫SD大鼠后，唾液中S-IgA型抗SpaP和GTFs抗体水平以及血清中IgG型抗SpaP和GTFs抗体水平均明显升高，并持续一段时间。④龋损评估结果提示：实验组与对照组比，龋损明显减少，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：①防龋基因疫苗pVAX1-Spap/P、pVAX1-GbpA/GBD、pVAX1-Spap/P-GbpA/GBD以温敏型生物降解水凝胶为载体，经不同途径免疫SD大鼠后能够诱导唾液中S-IgA型抗SpaP和GTFs以及血清中IgG型抗SpaP和GTFs特异性抗体的产生，减少大鼠龋损的发生。②以上重组质粒对动物一般安全性无明显影响。