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目的结直肠癌是现今世界常见的消化道恶性肿瘤之一,严重危害人类健康。结直肠癌已成为世界范围内癌症患者死亡的主要原因,在西方国家,结直肠癌是癌症死亡的第二原因。最新报告显示,在亚洲地区结直肠癌的发生呈上升趋势。结直肠癌是我国癌症死亡的第五大原因,在经济发达的城市,这个比例甚至更高。目前,结直肠癌的治疗方式包括手术治疗、放化疗,其中以手术治疗为主,但仍有20-30%的患者出现病情复发。为此,研究结直肠癌的肿瘤特异性标志物,为临床的诊断和治疗提供新的靶点和新思路,具有重要的理论及现实意义。Diversin又被称作锚蛋白重复结构域蛋白6(ankyrin repeat domain protein 6,ANKRD6),前期研究结果显示Diversin在非小细胞肺癌,乳腺癌,膀胱癌组织中表达水平显著高于癌旁组织。我们课题组前期研究发现Diversin在非小细胞肺癌中过度表达,在肿瘤发生发展中起促进作用,同时基因芯片结果显示目的基因ANKRD6在细胞上调控细胞周期:G1-S期检查点。目前Diversin在人类结直肠癌中的表达情况及意义尚不清楚,其是否具有调控肿瘤细胞增殖的作用及分子机制等都有待于进一步探讨,本次研究旨在探讨Diversin在结直肠癌细胞增殖中的作用,及对其分子机制进行初步探索。方法收集沈阳医学院附属中心医院2010-2012年经手术切除,病理证实为结直肠癌的蜡块标本作为研究对象。本研究经沈阳医学院当地机构伦理委员会审查批准进行。我们收集了来自相同患者的癌及癌旁组织标本,通过免疫组化的方法检测Diversin在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达水平。为了进一步研究Diversin对细胞增殖的作用,我们使用人结直肠癌细胞HCT116感染Diversin过表达慢病毒(LV-ANKRD6)及阴性对照慢病毒(LV-NC)和人结直肠癌细胞LOVO细胞感染Diversin敲低慢病毒(LV-ANKRD6-RNAi)及阴性对照组慢病毒(LV-siNC),采用MTS,流式细胞术,蛋白印记法对比检测Diversin上调和下调对结直肠癌细胞增殖,细胞周期及相关蛋白表达活化的影响。结果免疫组化结果显示,Diversin在人类结直肠癌组织中高表达,并与恶性肿瘤分化,临床分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。然而,Diversin过表达与年龄,性别,肿瘤部位之间没有统计学差异。MTS结果显示Diversin的过表达促进了结直肠癌细胞的增殖活力(P<0.05),而下调Diversin的表达抑制结直肠癌细胞增殖。流式细胞术测量细胞周期阶段的分布显示,与对照组细胞相比,具有Diversin过表达的HCT116细胞中G1期细胞的百分比降低,而S期细胞的百分比显著增加(G1:64.26%vs 47.42%,S:14.53%vs 36.89%,P<0.05),而在Diversin敲低的LOVO细胞中G1期细胞的百分比增加,S期细胞百分比减少(G1:30.15%vs 81.8%,S:52.80%vs 9.14%,P<0.05)。蛋白印记结果显示Diversin过表达的结直肠癌细胞HCT116中P21,P27蛋白表达水平降低,cyclinD,CDK4和cyclinE,CDK2的表达活性增加。同时,β-catenin蛋白表达水平没有明显变化,而p-JNK/JNK比率升高。而在Diversin下调的结直肠癌细胞LOVO中P21,P27蛋白表达水平显著增加,cyclinD,CDK4和cyclinE,CDK2的表达水平下降。同时,β-catenin蛋白表达水平没有显著变化,而p-JNK/JNK比率下降。结论Diversin在人类结直肠癌组织中高表达,与恶性肿瘤分化,临床分期和淋巴结转移呈正相关。Diversin通过P21,P27,cyclinE,CDK2,cyclinD,CDK4,p-JNK调控CRC细胞增殖,我们推测Diversin可能是通过G1-S检查点和非经典JNK通路发挥作用。